Purification and comparison of intracellular proteinase A in Candida spp. isolates from Malaysian and Iranian patients and infected mice

SummaryObjectiveTo compare the specific intracellular proteinase A activity in clinical isolates of Candida species isolated from Iranian and Malaysian patients, the blood and kidneys of mice infected by Candida cells isolated from these human patients.Patients and methodsThe intracellular proteinase A was extracted using glass beads and ultracentrifugation from yeasts cells and purified by ion-exchange chromatography (DEAE-cellulose), followed by affinity chromatography (ConA-agarose). Purity of proteinase A was controlled by SDS-PAGE and its identification was realized by western blot. Enzyme activity was performed using azocasein as substrate.ResultsIntracellular proteinase A enzyme activity was higher in Candida albicans (C. albicans) than in non-albicans Candida isolates from Malaysian and Iranian patients, mice blood and mice kidneys (P < 0.05). In clinical Candida spp. from human patients, proteinase A activity was significantly higher in Malaysian samples than in their Iranian counterparts (P < 0.05). However, Candida spp. isolates obtained from blood and kidneys of mice infected by human clinical strains of Candida spp. showed no significant differences in proteinase A activity between Malaysian and Iranian samples (P > 0.05). On the other hand, in both clinical and control yeast isolates obtained from Malaysian and Iranian patients, significant differences were found between systemic and non-systemic samples (P < 0.05) but this difference was not observed in mice blood and kidneys.ConclusionIn the present study, a strong proteinase A activity was observed for C. albicans and higher expression of this enzyme in clinical isolates from Malaysian and Iranian patients with systemic candidiasis indicated higher virulent nature of this yeast species when compared with non-albicans Candida strains.

RésuméObjectifPurifier et comparer l’activité de la protéinase A intracellulaire d’isolats cliniques de Candida sp. provenant de patients iraniens et malaisiens et du sang et des reins de souris infectées.Patients et méthodesLa protéinase A intracellulaire a été extraite à l’aide de perles de verre et par ultracentrifugation à partir des cellules de levures ; elle a été purifiée par chromatographie échangeuse d’ions (DEAE-cellulose) et par chromatographie d’affinité (ConA-agarose). La pureté de la protéinase A a été contrôlée par SDS-PAGE et son identification a été réalisée par western blot. L’activité enzymatique a été évaluée en utilisant comme substrat l’azocaséine.RésultatsLa protéinase A intracellulaire présente une activité enzymatique plus élevée chez C. albicans que chez les Candida non-albicans provenant de patients malaisiens et iraniens et des reins et du sang des souris infectées (p < 0,05). Dans les isolats cliniques de Candida sp. à partir de divers patients, la protéinase A présente une activité significativement plus élevée dans les échantillons provenant de Malaisie que dans leurs homologues iraniens (p < 0,05). Toutefois, les isolats de Candida sp. obtenus à partir du sang et des reins des souris infectées n’ont montré aucune différence significative dans l’activité la protéinase A avec les échantillons de Malaisie et d’Iran (p > 0,05). En outre, dans les isolats cliniques et les souches de contrôle, on a observé des différences significatives entre les échantillons systémiques et non systémiques (p < 0,05) ; en revanche, cette différence n’a pas été observée dans le sang et les reins des souris infectées.ConclusionDans la présente étude, une forte activité de la protéinase A de C. albicans et une expression élevée de cette enzyme ont été observées dans des isolats cliniques provenant de patients malaisiens et iraniens avec des candidoses systémiques montrant ainsi la virulence élevée de cette espèce par rapport à des souches de Candida non-albicans.