Purification and characterization of a 33 kDa extracellular proteinase from Microsporum cookei

SummaryObjectiveAn extracellular proteinase synthesized by the geophilic dermatophyte Microsporum cookei has been purified and characterized.Material and methodsThe soil isolate of M. cookei was cultivated in modified Czapek-Dox liquid medium containing 0.1% bacteriological peptone and 1% glucose as the nitrogen and carbon sources. Purification of the proteinase was accomplished by (NH4)2SO4 precipitation, followed by ion-exchange chromatography.ResultsAnalysis of the enzyme by SDS-PAGE revealed a single polypeptide chain with an apparent molecular mass of 33 kDa. A keratinolytic activity was evidenced for the enzyme by the keratin azure test. The inhibition profile and the good activity of the enzyme towards the synthetic substrate N-succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide suggested that it belongs to the subtilisin group of serine proteinases.ConclusionThe keratinolytic properties of M. cookei suggest that this fungus may be an alternative for the recycling of industrial keratinic wastes.

RésuméObjectifUne protéase sécrétée par Microsporum cookei, champignon dermatophyte et géophile, a été purifiée et caractérisée.Matériel et méthodesUn isolat de M. cookei obtenu du sol a été cultivé en milieu liquide Czapek-Dox modifié contenant 0,1 % de peptone bactériologique et 1 % de glucose comme seules sources d’azote et de carbone. La purification a débuté par une précipitation des protéines du filtrat de culture par 80 % de saturation en sulfate d’ammonium, suivie d’une chromatographie par échange d’ions.RésultatsLa pureté de l’enzyme a été contrôlée par électrophorèse SDS-PAGE qui a révélé une unique chaîne peptidique d’une masse moléculaire apparente de 33 kDa. Une activité kératinolytique a été mise en évidence grâce au test kératine-azure. Le profil d’inhibition, ainsi que de bonnes constantes cinétiques vis-à-vis du substrat N-succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide suggèrent que l’enzyme appartient à la famille des sérine-protéases de type subtilisine.ConclusionLes capacités kératinolytiques de M. cookei permettent d’envisager ce champignon comme une alternative dans le recyclage des déchets riches en kératine issus d’abattoirs industriels.