Support fermé : une réalité clinique pour vitrifier en conditions aseptiques les ovocytes et embryons

RésuméAfin de réduire la probabilité de formation de cristaux de glace, les techniques classiques de vitrification favorisent le contact du matériel biologique avec l’azote liquide afin d’atteindre des vitesses de refroidissement supérieures à 20,000 °C/min. Des systèmes de contentions « ouvert » (Cryoloop, cryotop, cryoleaf, Vitriplug), permettant ce contact, sont utilisés pour atteindre de telles vitesses. Néanmoins, en vue de garantir une sécurité sanitaire au cours du refroidissement et stockage, il est indispensable de refroidir et conditionner les embryons dans des conditions aseptiques. Un support n’autorisant pas le contact avec l’azote liquide et appelé « VitriSafe » a été développé pour vitrifier avec succès les ovocytes en métaphase II et les embryons à différents stades de développement. En raison d’une thermo-isolation ayant pour effet de réduire la vitesse de refroidissement à moins de 2,000 °C/min, il a été nécessaire d’adapter sans induire un effet toxique les concentrations intracellulaires en cryoprotecteurs (CP) pour assurer une survie acceptable. Des résultats prometteurs sont observés après vitrification d’ovocytes, zygotes, morulae et blastocystes en conditions d’asepsie complètes.

Vitrification with the use of “Open” carrier devices (Cryoloop, cryotop, cryoleaf, Vitriplug) which allowed the contact with liquid nitrogen has become a more popular way to achieve cooling rate superior to 20.000 °C/min. Even though the question of contamination with liquid nitrogen during ultra-rapid cooling and storage remain debatable with the use of “open” devices, it is important to revise the carrier system in a way, which minimizes the risk of contamination. According to the EU tissues and cells directive, it is advisable that the cooling and storage should be carried out in embryo carrier devices ensuring complete separation of the embryos from liquid nitrogen in a way, which minimizes the risk of contamination. The consequence of a reduction in the cooling rate resulting from the heat-insulating barrier of aseptic devices has to be counteracted by gradually increasing intracellular concentrations of cryoprotectants without inducing a toxic effect. We developed an aseptic vitrification method of vitrification for MII oocytes and embryos at different stage of development using the “VitriSafe” as “closed” carrier device.