Choix des amorces : élément déterminant dans le diagnostic moléculaire de la leishmaniose cutanée

RésuméLa leishmaniose cutanée (LC) est une maladie parasitaire qui constitue un problème de santé publique aussi bien dans le monde qu’en Tunisie. Son diagnostic repose sur des techniques de routine, examen direct (ED) et culture, qui, en raison de plusieurs facteurs, manquent de sensibilité. La biologie moléculaire, plus rapide et plus sensible, a montré son apport dans le diagnostic de la LC. Le but de notre travail était de démontrer, d’une part, l’apport de la Polymerase Chain Reaction (PCR) dans le diagnostic de la LC (en comparant les résultats obtenus par cette technique de biologie moléculaire à ceux trouvés à l’ED) et, d’autre part, de comparer deux paires d’amorces ciblant le gène leishmanien codant pour la sous-unité 18 s ribosomale : la paire R221/R332 (PCR1) et la paire Lei70L/Lei70R (PCR2). Notre travail a été réalisé sur 299 échantillons. Cent quatre-vingt-huit prélèvements étaient positifs par l’ED et/ou la PCR et 111 étaient négatifs. Deux prélèvements seulement étaient positifs uniquement par l’ED contre 74 qui étaient positifs uniquement en PCR (PCR1 et/ou PCR2). Parmi ces 74 prélèvements, 64 étaient positifs par la PCR2 seule contre deux prélèvements qui étaient positifs par la PCR1 seule. Les huit prélèvements restants étaient positifs à la fois par la PCR1 et la PCR2. La PCR (notamment la PCR2) montre un pourcentage de positivité plus important que l’ED : 98,93 % pour la PCR contre 60,6 % pour l’ED.

The cutaneous leishmaniasis (CL) is a parasitic disease which represents a serious problem for the public health not only in Tunisia but also all over the world. Its diagnosis is based on the techniques which are usually used, direct examination and in vitro culture. Because of several factors, these techniques lack sensitivity. The molecular biology, which is indeed more rapid and more sensitive, has proved its effectiveness in diagnosis of the CL. There are two main aims for our research work. First, to show the contribution of the Polymerase Chain Reaction (PCR) during the diagnosis of CL (of course by comparing the results obtained when using this technique with those found through the direct examination); second, to compare the two pairs of primers which amplify the leishmanien gene coding for the 18 s ribosomal sub-unit: the pair R221/R332 (PCR1) and the pair Lei70L/Lei70R (PCR2). Our work was carried out upon 299 samples. One hundred and eighty-eight of them were positive using the direct examination and/or the PCR and 111 were negative. Only two samples were positive using of course the direct examination in comparison with 74 which were positive when using only the PCR (PCR1 and/or PCR2). Among these 74 samples, 64 where positive using only PCR2 in comparison with two samples which were positive using only PCR1. The eight remaining samples were at once positive for the PCR1 and the PCR2. The PCR (notably the PCR2) has proved a more significant percentage of positivity in comparison with direct examination: 98.98% for the PCR and 60.6% for direct examination.