Mise au point d’une technique de RT-PCR duplex en temps réel pour la détection des virus influenza A et B

RésuméLa grippe est une infection virale qui sévit sur un mode épidémique hivernal. Les infections grippales peuvent être plus difficiles à diagnostiquer et particulièrement sévères chez les enfants, les personnes porteuses de pathologies chroniques et les personnes âgées. Nous avons mis au point une technique de RT-PCR duplex en temps réel pour la détection des virus influenza A et B. La sensibilité de la technique est de 0,01 TCID50/ml pour la grippe A et 0,1 TCID50/ml pour la grippe B. Aucune réaction croisée avec d’autres virus respiratoires n’a été observée. Avec cette technique, nous avons testé 119 prélèvements respiratoires (aspirations rhinopharyngées et liquides de lavage broncho-alvéolaires [LBA]) provenant de patients âgés de un mois à 81 ans collectés au CHRU de Lille entre novembre 2005 et janvier 2006. Ces échantillons avaient fait l’objet d’une recherche de virus à tropisme respiratoire par immunofluorescence (IF) ou isolement en culture cellulaire. Quatre échantillons étaient positifs pour la grippe A, dont un liquide de LBA pour lequel l’IF était négative. Nous avons donc mis au point une technique rapide, sensible et spécifique, applicable au diagnostic des infections grippales, qui devra cependant être testée sur un nombre plus important d’échantillons au cours d’une épidémie de grippe saisonnière.

Influenza viruses continue to be accountable for winter outbreaks. The potential for developing complications is higher in certain risk groups, such as children, the elderly and individuals with chronic medical conditions. We have presented a duplex real-time RT-PCR for detection of influenza A and B. The sensibility of our method was estimated at 0.01 TCID50/ml for detection of influenza A and 0.1 TCID50/ml for influenza B. Any other viruses with respiratory tract tropism were detected with our method. After that, we tested our duplex RT-PCR on 119 samples (nasal aspirates and liquids of broncho-alveolar washes) collected in the CHRU of Lille between November 2005 and January 2006 from patients aged one month to 81 years. Conventional methods such as direct immunofluorescence (IF) assay and/or cell culture were applied on these samples. Four samples were positive for influenza A virus detection and, in particular, one liquid of broncho-alveolar wash for which the direct IF assay was negative. Thus, our method is adapted to diagnosis of flu infections. Nevertheless, our duplex RT-PCR will be tested during a flu outbreak.