Evaluation of immunophenotyping, proliferation and osteogenic differentiation potential of SSEA-4 positive stem cells derived from pulp of deciduous teeth

چکیده

کلمات کلیدی

1.مقدمه

2. مواد و روش ها

2.1. آماده سازی نمونه

2.2.جداسازی و کشت SHED ها. 

2.3. ایمونوفنوتایپینگ سیتومتری جریان

2.4. مرتب سازی سلول های فعال فلوئورسنت (facs)

2.5. زمان دوبرابر شدن جمعیت و تکثیر سلول 

2.6. تمایز استئوژنیک

2.7. رنگ آمیزی آلیزارین قرمز.

2.8.PCR زمان واقعی کمّی

2.9. تحلیل آماری

3. نتایج

3.1.جداسازی و کشت SSEA-4(+) و SHED های نامرتب

جدول 1. توالی های آغازگرهای مورد استفاده برای ارزیابی پتانسیل های تمایز U-SHED ها و S-SHED ها در رده بندی استئوژنیک.

شکل 1. سلول های بنیادی جدا شده از پالپ دندانی دندان های شیری؛ SHED های نامرتب و SHED های SSEA-4 مثبت (مرتب). نوار مقیاس = 300 μm..

3.2.خصوصیات ایمونوفنوتایپینگ

3.3.میزان رشد SSEA-4(+) کشت شده و SHED های نامرتب

شکل 2. هیستوگرام های ایمونوفنوتایپینگ نماینده ی SHED ها؛ نشانگرهای CD به صورت بی رنگ نشان داده شده اند و کنترل ایزوتوپ مربوطه به رنگ خاکستری نشان داده شده است. مقادیر، بیان میانگین ± انحراف استاندارد (SD) می باشند.

3.4.الگوی سیتوشیمیایی و مولکولی سلول های متمایز

4. بحث

شکل 3. هیستوگرام نماینده بیان SSEA-4 در؛ A SHED های نامرتب و B مرتب. 

شکل 4. میزان رشد U-SHED ها و S-SHED های کشت شده؛ یک منحنی رشد نمایشی ارزیابی شده توسط آزمایش MTT، زمان دو برابر شدن جمعیت U-SHED ها و S-SHED ها. مقادیر، نشان دهنده ی میانگین، و میله های خطا نشان دهنده ی انحراف استاندارد می باشند.

شکل 5. رنگ آمیزی آلیزارین قرمز U-SHED ها و S-SHED های غیرمتمایز و متمایز به استئوبلاست ها؛ A U-SHED های متمایز، B S-SHED های متمایز، C U-SHED های غیرمتمایز (کنترل)، D S-SHED های غیرمتمایز (کنترل). میله مقیاس = 100 μm. 

شکل 6. نتایج RT-PCR کمّی سلول های متمایز. داده های U-SHED ها و S-SHED های متمایز به GAPDH متناظر در ارجاع به سلول های غیرمتمایز عادی شده بودند.

5.نتیجه گیری