Actividad lacasa en cepas de Cryptococcus gattii aisladas de cabras

ResumenCryptococcus neoformans y Cryptococcus gattii son los principales agentes de criptococosis, una grave micosis del hombre y los animales. Entre los factores de patogenicidad de estas especies cabe destacar la lacasa (fenoloxidasa), enzima producida por éstas y otras especies fúngicas, que induce la síntesis de melanina a partir de compuestos di-hidroxifenólicos.La gran mayoría de los numerosos estudios sobre la lacasa se han efectuado con C. neoformans, y la información específica en C. gattii es muy escasa. El objetivo de este estudio ha sido evaluar la actividad de la lacasa en aislamientos de C. gattii serotipo B procedentes de cabras inmunocompetentes muertas por criptococosis durante varios brotes epidémicos desarrollados en Cáceres (Extremadura, España).La producción de lacasa de estos aislamientos se ha comparado con la de otros de la misma especie y también con cepas de C. neoformans. Se procedió a la ruptura de las levaduras por métodos físicos, y el sobrenadante de cada aislamiento se añadió a una solución 20 mM de L-dopa. La actividad enzimática se midió a través de la absorbancia como unidades enzimáticas (EU) a 450 nm. Los valores máximos de EU se observaron en tres cepas de C. gattii aisladas de cabras (EU >12), mientras que el valor mas bajo se observó en una cepa ambiental de C. gattii serotipo C (EU = 0,7). Para C. neoformans la mayor actividad lacasa se obtuvo en una cepa del serotipo A aislada en un paciente con meningitis criptocócica.Todos los aislamientos de C. gattii procedentes de los animales muertos en brotes epidémicos mostraron diferentes grados de actividad lacasa.Esta enzima parece representar un factor de patogenicidad importante, aunque no exclusivo, en esta especie.

SummaryCryptococcosis is a life-threatening infection in humans and animals caused by encapsulated yeasts of the genus Cryptococcus Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii are the main agents of this mycosis Until 2002 C. gattii was classified as a variety of C. neoformans but now is accepted as an independent species. The laccase (phenoloxydase) enzyme produced by these yeasts is considered one of the main pathogenic factors for its ability to induce melanin from dihydroxyphenolic compounds. The vast majority of the studies in laccase and melanin synthesis have been developed using isolates of C. neoformans. The main objective of this study was to evaluate laccase activity in strains of C. gattii, serotype B isolated from immunocompetent goats that died of lung and disseminated cryptococcosis, in several outbreaks occurring in Spain. The laccase activities of these isolates were compared with those of other strains of C. gattii and C. neoformans. After fungal cell rupture, the supernatant of each isolate was analyzed for its laccase activity using as substrate an L-dopa 20 mM solution. The degree of enzymatic activity was assessed according to its absorbance at 450 nm and scored using Enzymatic Units (EU). The maximum values were observed in three strains of C. gattii from goats (EU > 12). The smallest values were observed in one environmental isolate of C. gattii serotype C (EU = 0.7). The highest recorded value for C. neoformans was 6.3 EU in a serotype A isolate from one human case of meningitis. C. gattii serotype B obtained from goats showed different degrees of laccase activity, being the highest in those isolated from severe outbreaks of cryptococcosis. This enzyme appears to represent a major, though nonexclusive, pathogenic factor for Cryptococcus gattii.