Amino acid substitution in Cryptococcus neoformans lanosterol 14-α-demethylase involved in fluconazole resistance in clinical isolates

The molecular basis of fluconazole resistance in Cryptococcus neoformans has been poorly studied. A common azole resistance mechanism in Candida species is the acquisition of point mutations in the ERG11 gene encoding the enzyme lanosterol 14-α-demethylase, target of the azole class of drugs. In C. neoformans only two mutations were described in this gene. In order to evaluate other mutations that could be implicated in fluconazole resistance in C. neoformans we studied the genomic sequence of the ERG11 gene in 11 clinical isolates with minimal inhibitory concentration (MIC) values to fluconazole of ≥16 μg/ml. The sequencing revealed the G1855A mutation in 3 isolates, resulting in the enzyme amino acid substitution G484S. These strains were isolated from two fluconazole-treated patients. This mutation would not intervene in the susceptibility to itraconazole and voriconazole.

ResumenLas bases moleculares de la resistencia al fluconazol en Cryptococcus neoformans han sido poco estudiadas. Un mecanismo de resistencia a los azoles en Candida albicans es la adquisición de mutaciones puntuales en el gen ERG11, que codifica la enzima lanosterol 14 α-demetilasa, blanco de las drogas azólicas. En C. neoformans solo 2 mutaciones en este gen han sido descriptas. Con el objetivo de estudiar otras mutaciones que podrían estar implicadas en la resistencia al fluconazol en C. neoformans, realizamos la secuenciación del gen ERG11 de 11 aislamientos clínicos con valores de concentración inhibitoria mínima (CIM) de fluconazol ≥16 μg/ml. En 3 aislamientos, la secuenciación reveló la mutación G1855A, que da como resultado la sustitución aminoacídica G484S. Estos aislamientos fueron recuperados de 2 pacientes tratados con fluconazol. Esta mutación no intervendría en la sensibilidad al itraconazol y al voriconazol.