Contribution à l’étude de l’apoptose par la cytométrie en flux des cellules souches hématopoïétiques CD34+ avant et après le processus de congélation

RésuméL’apoptose, forme particulière de mort cellulaire survenant chez la majorité des cellules devenues inutiles ou endommagées, joue un rôle crucial dans le développement des organismes pluricellulaires en assurant le maintien de l’homéostasie cellulaire. Elle intervient dans le processus de développement normal des organismes ainsi que dans la défense immunitaire et la détection des cellules cancéreuses. Un blocage du programme de la machinerie apoptotique pourrait être responsable de certaines maladies neurodégénératives et auto-immunes et jouer un rôle fondamental à différentes étapes de la carcinogenèse. Des études de l’apoptose des cellules souches hématopoïétiques CD34+ qui sont destinées à être greffées aux patients atteints d’hémopathies malignes ont montré que la connaissance de la cinétique de l’apoptose au niveau des cellules souches hématopoïétiques CD34+ après les processus de cryoconservation s’avère indispensable, car elle permet de quantifier le nombre exact de cellules souches hématopoïétiques CD34+ vivantes et donc d’éliminer tout risque associé à l’injection de cellules mortes aux malades. Dans ce travail, nous avons contribué à étudier l’apoptose par cytométrie en flux des cellules souches hématopoïétiques CD34+ avant et après la congélation, en utilisant l’annexine V comme sonde spécifique permettant la détection de la phosphatidylsérine, l’une des caractéristiques majeures de l’apoptose. En revanche, nous avons constaté une induction plus prononcée de l’apoptose au niveau du sang périphérique mobilisé qu’au niveau de la cytaphérèse (après décongélation : 29,79 % de cellules souches hématopoïétiques CD34+ apoptotiques à partir du sang périphérique contre 11,67 % de cellules souches hématopoïétiques CD34+ apoptotiques à partir de cytaphérèse). De plus, nous avons remarqué que les cellules souches hématopoïétiques CD34+ ont un statut de viabilité meilleur que celui des autres cellules mononucléées. Ces résultats mettent en valeur la fiabilité, la simplicité et l’efficacité de la cytométrie en flux quant à l’analyse de l’apoptose des cellules souches hématopoïétiques CD34+ en suivant l’intensité de fluorescence de l’annexine V.

Apoptosis represents a particular form of programmed cell death which appears in all the damaged cells and potentially hazardous. It plays a crucial role in the development of multicellular organisms by assuring and maintaining the cellular homeostasis. Thus, apoptosis intervenes not only in the normal process of organisms’ development but also in immune defence and in cancerous cells detection. Indeed, any blockage in the program of the apoptotic machinery would be responsible of some neurodegenerative and auto-immune diseases and could play a crucial role in different steps of carcinogenesis. Some researchers were very interested in studying apoptosis in hematopoietic stem cells CD34+ which could be intended to be reinfused to patients suffering from malignant diseases. They have noted that kinetic study of apoptosis of the hematopoietic stem cells CD34+ after the process of cryoconservation is also necessary. Such study permits to quantify the real and exact number of the viable hematopoietic stem cells CD34+ and therefore to eliminate such risk which would be associated with the reinfusion of apoptotic cells to patients. In this paper, we describe our contribution to hematopoietic stem cells CD34+ study by flow cytometry before and after cryopreservation by using annexin V as a specific probe allowing detection of phosphatidyl serine, one of the major features of apoptosis. But, we have noted a pronounced induction of apoptosis in peripheral mobilized blood compared to cytapheresis (after cryopreservation: 29.79% of apoptotic HSC CD34+ in peripheral mobilized blood but only 11.67% apoptotic HSC CD34+ in cytapheresis). Besides, we have noticed that hematopoietic stem cells CD34+ have had a statute of viability better than other mononuclear cells. These results put in value the reliability, the simplicity and the efficiency of flow cytometry for the analysis of apoptosis in hematopoietic stem cells CD34+ by following the intensity of fluorescence of annexin V.