Comparative aspects on the role of polypyrimidine tract-binding protein in internal initiation of hepatitis C virus and picornavirus RNAs

We compared the effects of polypyrimidine tract-binding protein (PTB) on hepatitis C virus (HCV genotype IIa), encephalomyocarditis virus (EMCV) and poliovirus internal ribosome entry site (IRES) activities in vitro. It bound strongly to EMCV IRES, but weakly to PV and HCV RNAs. PV IRES showed the strongest dependency to PTB and it showed less than one-tenth of IRES activity after the immuno-depletion of PTB from HeLa S10 lysate with pre-coated anti-PTB IgG beads, comparing to the normal IgG beads-treated S10 lysate. EMCV IRES activity was approximately 40% of that of normal control after PTB depletion. Especially, HCV IRES activity was approximately 95%, and most weekly affected by the depletion of PTB. Repletion of PTB to depleted S10 lysate restored activities of PV and EMCV IRESs. The data suggest that PTB plays an important role in picornaviral IRESs, but not in HCV IRES.

RésuméDans notre étude, nous avons comparé les effet de la ‘polypyrimidine track-binding’ (PTB) virus de l’hépatite C (génotype IIa) et l’activité du virus encéphalomyodardite (EMCV) et de l’IRES du poliovirus in vitro. La PTB se fixe de manière résistante à l’IRES de l’EMCV mais de manière fragile à l’ARN du PV et du VHC. L’IRES du PV montre la dépendance la plus forte à la PTB et il montre une activité d’IRES de moins de un dixième après immuno-déplétion de la PTB du lysat HeLa10 par des billes d’IgG anti-PTB prêtes à l’emploi, par rapport au HeLa10 traité par des billes d’IgG normales. L’activité de l’IRES de l’EMCV était approximativement égale à 40% de celle sous contrôle normal après déplétion de la PTB. L’activité de l’IRES du VHC était approximativement égale à 95% et la moins sensible à la déplétion de la PTB. La réplétion de la PTB au lysat S10 appauvri rétablit les activités des IRES du PV et de l’EMCV. Les données suggèrent que la PTB joue un rôle important dans les IRES picornaviraux mais pas dans les IRES du VHC. De plus,