Developing a double-antigen sandwich ELISA for effective detection of human hepatitis B core antibody

A new double-antigen sandwich ELISA for detecting antibody against the human hepatitis B core antigen (anti-HBc) was developed, with recombinant HBc (rHBcAg) immobilized on the solid phase of the plate and a HRP–rHBcAg conjugation for detection. The rHBcAg was expressed in Escherichia coli and purified by a monoclonal antibody (against HBcAg) specific affinity chromatography. This sandwich ELISA could give a semi-quantitative measurement of anti-HBc concentration in the specimen and was 32–256-folds more sensitive than the competitive ELISA. Total of 942 clinical serum samples were tested in parallel by the sandwich ELISA and the commercially competitive ELISA kit. Overall agreement of 98.4% (927 of 942 cases) was obtained. Ten of 15 (67%) discordant specimens reactive by the sandwich assay but negative by the competitive ELISA resulted from the increased sensitivity of the sandwich assay, as other hepatitis B markers present indicated previously or currently being exposed to HBV.

RésuméUn nouveau test d’ELISA en double-antigène sandwich pour détecter les anticorps anti-hépatite B antigène central (HBc) a été développé. Le système du test comprend un antigène HBc marqué à HRP et un autre antigène HBc immobilisé sur la microplaque. Les deux antigènes ont été exprimés dans les corps d’Escherichia Coli et ont été obtenus après avoir été purifiés par chromatographie. Ce test s’agit d’une détection pour la demi-quantification de L’anticorps anti-HBc. 942 sésums des patients ont été à La fois détectés par ELISA en sandwich et ELISA en compétition. 98.4% des résultats ont coïncidé. 10 sérums négatifs par ELISA en compétition ont été découverts positifs par ELISA en sandwich. En même temps, Les autres marques de Hepatite-B ont été découvertes des 10 sérums par les deux methodes. Il a prouvé qu’ELISA en double-antigène était plus sensible.