کد مقاله کد نشریه سال انتشار مقاله انگلیسی نسخه تمام متن
11010790 1806121 2018 8 صفحه PDF دانلود رایگان
عنوان انگلیسی مقاله ISI
A simple and highly efficient method for gene silencing in Escherichia coli
ترجمه فارسی عنوان
روش ساده و بسیار کارامد برای خاموش کردن ژن در E.coli
کلمات کلیدی
خاموش کردن ژن، RNA مداخله‌گر، ناک داون، E.coli
فهرست مطالب مقاله
چکیده

کلمات کلیدی

1. مقدمه

2. مواد و روش‌ها

1.2- سویه‌های باکتریایی و محیط کشت‌ها

2.2- سنجش حرکت باکتری

3.2- ساخت جهش‌های ایزوژنیک

4.2- تکنیک‌های کلونینگ و DNA نوترکیب

5.2- وسترن بلات

6.2- استخراج RNA و PCR در زمان واقعی کمی (TaqMan)

3. نتایج

1.3- تجزیه و تحلیل روش خاموش کردن ژن در سطح رونویسی و ترجمه

4. بحث

نقش نویسندگان

تضاد منافع

زیرنویس شکل‌ها

جداول

 
ترجمه چکیده
در این مقاله، ما یک پروتکل ساده و قابل انجام برای خاموش کردن ژن در E.coli ارائه می‌کنیم. در این فرایند، RNA آنتی سنس (asRNA) به طول 400 نوکلئوتید و مکمل هدف توسط یک پلاسمید بیانی تولید می‌شود. asRNA طراحی شده باید به طور ایده آل حداقل جایگاه 10- پروموتر و توالی شاین دالگارنو و 300 جفت باز از چارچوب خوانش باز ژن هدف را پوشش دهد. ما نشان دادیم که روند رونویسی هدف تحت تأثیر قرار نمی‌گیرد، در حالی که روند ترجمه مختل شده است. بر اساس بیان زیاد asRNA، ما قادر به گسترش اثر خاموش کردن به سطح ناک اوت شدیم. با بیان القایی، ما نشان می‌دهیم که تعدیل ژن نیز ممکن است. این روش به طور گسترده‌ای برای مطالعه عملکرد ژن در E. coli و سایر باکتری‌ها مفید خواهد بود.
موضوعات مرتبط
علوم زیستی و بیوفناوری بیوشیمی، ژنتیک و زیست شناسی مولکولی بیوتکنولوژی یا زیست‌فناوری
پیش نمایش مقاله
روش ساده و بسیار کارامد برای خاموش کردن ژن در E.coli
چکیده انگلیسی
Here we present a simple and rapidly achievable protocol for gene silencing in Escherichia coli (E. coli). In this procedure, antisense RNA (asRNA) of 400-nucleotides (nt) length and absolute complementarity to the target is produced by an expression plasmid. The designed asRNA should ideally cover at least the −10 site of the promoter and the Shine-Dalgarno sequence, and additional 300-bp of the following open reading frame of the target gene. We show that the transcription process of the target is not affected at all, whereas the translation process is impaired. Based on high constitutive expression of asRNA we were able to extend the silencing effect to knock-out levels. By inducible expression, we show that also the modulation is possible. This technique should be widely useful to study gene function in E. coli and other bacteria.
ناشر
Database: Elsevier - ScienceDirect (ساینس دایرکت)
Journal: Journal of Microbiological Methods - Volume 154, November 2018, Pages 25-32
نویسندگان
, , , ,