Place de l’identification des leishmanies par la polymerase chain reaction – restriction fragment length polymerase dans l’étude de l’épidémiologie des leishmanioses cutanées en Tunisie

RésuméButTrois formes de leishmaniose cutanée (LC) sont décrites en Tunisie. L’identification des espèces en cause est utile aussi bien pour préciser les données épidémiologiques que pour la prise en charge des cas. L’objectif de ce travail est d’évaluer la technique de PCR-RFLP dans l’identification des espèces de leishmanies responsables des 3 formes de LC rencontrées en Tunisie et de confronter les résultats de cette technique à ceux de l’électrophorèse des isoenzymes.Patients et méthodesSoixante et une lésions de LC ont été prélevées. Les prélèvements dermiques ont été mis en culture sur milieu NNN et analysés par PCR ciblant la région ITS1 de l’ADN ribosomal. L’identification d’espèce a été réalisée par électrophorèse des isoenzymes pour les cultures positives et par analyse du profil de restriction des produits de PCR.RésultatsLa culture était positive pour 38 (62 %) prélèvements. Le typage iso-enzymatique de 32 isolats a identifié 3 L. infantum, 23 L. major MON-25 et 6 L. tropica MON-8. La PCR était positive pour 60 prélèvements (98,4 %). L’analyse du profil de restriction a permis d’identifier l’espèce dans 56 cas : 12 L. infantum, 38 L. major et 6 L. tropica. Les résultats de la PCR-RFLP étaient concordants avec ceux du typage iso-enzymatique pour les 32 souches identifiées par les 2 techniques. Toutes les identifications étaient compatibles avec la distribution géographique des 3 formes de LC endémiques en Tunisie.ConclusionLes résultats de la PCR-RFLP sont parfaitement corrélés à ceux du typage iso-enzymatique dans l’identification des leishmanies responsables de LC en Tunisie. Cette technique se confirme une alternative de choix grâce à sa simplicité, sa rapidité d’exécution et surtout sa pratique directement sur les prélèvements lésionnels.

AimThree forms of cutaneous leishmaniasis (CL) are endemic in Tunisia. The identification of the causative species is useful to complete epidemiological data and to manage the cases. The aim of this study is to assess PCR-RFLP technique in the identification of Leishmania species responsible of CL in Tunisia and to compare the results of this technique to those of isoenzyme analysis.Patients and methodsSixty-one CL lesions were sampled. Dermal samples were tested by culture on NNN medium and analyzed by PCR-RFLP assay targeting the ITS1 region of ribosomal DNA. Species identification was performed by both iso-enzymatic typing for positive cultures and analysis of restriction profiles after enzymatic digestion by HaeIII of the obtained amplicons.ResultsThirty-eight (62%) samples were positive by culture. The iso-enzymatic typing of 32 isolates identified 3 L. infantum, 23 L. major MON-25 and 6 L. tropica MON-8. Sixty samples were positive by PCR. The PCR-RFLP digestion profiles of the 56 PCR products identified 12 L. infantum, 38 L. major and 6 L. tropica. The results of both techniques were concordant in the 32 strains identified by both techniques. Species identification correlated with the geographical distribution of CL forms endemic in Tunisia.ConclusionResults of PCR-RFLP revealed highly concordant with those of isoenzyme electrophoresis. Thanks to its simplicity, rapidity and ability to be performed directly on biological samples, this technique appears as an interesting alternative for the identification of Leishmania strains responsible of CL in Tunisia.