دانلود مقالات ISI درباره روش ژل الکتروفورز گرادیانت دناتورینگ + ترجمه فارسی

امروزه روش های متعددی برای تعیین ساختار جوامع میکروبی بر اساس تکنیک های مولکولی به کار می رود. از جمله این روش ها استفاده از روش ژل الکتروفورز گرادیانت دناتورینگ (DGGE) است. این روش برپایه استفاده از تنوع در توالی نوکلئوتیدی ژنهای S rRNA 16 و S rRNA18 متمرکز است. این روش بر اساس پایداری جفت باز GC) سه پیوند هیدروژنی برای هر جفت) در مقابل جفتباز AT) دو پیوند هیدروژنی) عمل می کند. مخلوطی از قطعات DNA با توالی های متفاوت در یک ژل آکریلامید با شیب افزایش مواد دناتوره کننده DNA،الکتروفور می شوند. عموما قطعات DNA غنی از GC مقاومت بیشتری کرده و تا زمان رسیدن به غلظت بیشتری از مواد دناتوره کننده، دو رشته ای باقی می ماند. قطعات DNA دو رشته ای بهتر در ژل آکریلامید حرکت می کنند، در حالیکه مولکولهای DNA دناتوره شده بزرگتر شده و حرکت آنها در ژل کاهش یافته یا متوقف می شود. عمل الکتروفورز در یک ژل عمودی اکریل آمید در یک شیب غلظتی از دناتورانت ها صورت می گیرد. در این تکنیک مهم است که بافر در محفظه بالایی به خوبی سیرکوله شود تا از اتلاف اجزای آن جلوگیری گردد. بعلاوه، ژل باید در دمای ثابت و هموژن باشد (در اینجا مثلا 60 درجه سانتیگراد). برای تکمیل این عمل، ژل در یک اکواریوم شامل بافر قرار داده می شود. بافر با استفاده از پمپ ترموستات بین محفظه بالایی بافر و تانک سیرکوله می گردد. به منظور تسهیل جریان محلول مازاد از بخش بالایی دو سوراخ در قسمت بالایی تعبیه گردیده است. در بعضی سیستم ها، همزدن بافر و نیز ایجاد یکنواخت دمایی با استفاده از یک مگنت که توسط همزن قرار گرفته در زیر آن است، صورت می گیرد.