کد مقاله کد نشریه سال انتشار مقاله انگلیسی نسخه تمام متن
10532813 961725 2013 5 صفحه PDF دانلود رایگان
عنوان انگلیسی مقاله ISI
Nanomolar to sub-picomolar affinity measurements of antibody-antigen interactions and protein multimerizations: Fluorescence-assisted high-performance liquid chromatography
ترجمه فارسی عنوان
اندازه گیری نانوذرات نانو ذرات پیکومولار در اثر متابولیسم آنتی بادی و مولتیپلازی پروتئین: کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا با فلورسانس
کلمات کلیدی
کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا، حد تفکیک، تست اتصال، بالا بودن وابستگی،
موضوعات مرتبط
مهندسی و علوم پایه شیمی شیمی آنالیزی یا شیمی تجزیه
چکیده انگلیسی
Although several techniques exist for the measurement of high-affinity interactions, it is still challenging to determine dissociation constants around or even below 1 pM. During the analysis of several human-derived monoclonal antibodies to adalimumab, we found a clone with a very high affinity that could not be measured using conventional surface plasmon resonance assays. We developed a straightforward and robust method to measure affinities in the nanomolar to sub-picomolar range. The assay is based on separation of bound and free fluorescently labeled antigen using size exclusion chromatography and quantification by in-line fluorescence detection. We describe optimal conditions and procedures that result in a very sensitive assay that can be used to reliably determine ultra-high affinities. Using the method described in this article, a dissociation constant of 0.78 pM could be determined for the anti-adalimumab antibody.
ناشر
Database: Elsevier - ScienceDirect (ساینس دایرکت)
Journal: Analytical Biochemistry - Volume 437, Issue 2, 15 June 2013, Pages 118-122
نویسندگان
, , , , , , ,