Permeabilization of Corynebacterium glutamicum for NAD(P)H-dependent intracellular enzyme activity measurement

Permeabilization of Corynebacterium glutamicum cells permits direct determination of enzyme activity measuring NAD(P)H after appropriate calibration and correction for cell density. The optimized conditions found were the treatment of 10 mg cells/ml (dry weight) by Triton X-100 at a final concentration of 0.05% for 5 min at room temperature. Glucose-6-phosphate dehydrogenase and 6-phosphogluconate dehydrogenase activities were very close to those determined in the cell-free extract. In cell-free extracts malic enzyme activity was about double and that of isocitrate dehydrogenase about triple the values in permeabilized cells. Km values were similar in cell-free extract and permeabilized cells, but larger than literature values obtained with purified enzymes.

RésuméLa perméabilisation de cellules de Corynebacterium glutamicum permet la détermination directe de ĺactivité enzymatique en mesurant le NAD(P)H après une calibration appropriée et une correction de la densité cellulaire. Les conditions optimisées trouvées sont le traitement de 10 mg de cellules/ml (poids sec) avec du triton X-100 d´une concentration finale de 0,05% pendant 5 min à température ambiante. Ĺactivité de la glucose-6-phosphate déshydrogénase et de la 6-phosphogluconate déshydrogénase était très proche a celle déterminée dans un extrait sans cellules. Dans ĺextrait sans cellules, ĺactivité de la malate déshydrogénase était environ deux fois plus élevée que dans des cellules perméabilisées et celle de ĺisocitrate déshydrogénase environ trois fois plus élevée. Les valeurs de Km étaient similaires dans ĺextrait sans cellules et les cellules perméabilisées, mais plus élevées que les valeurs de la littérature atteintes avec des enzymes purifiées.