Effets du peroxynitrite dérivé du monoxyde d’azote sur des explants oculaires bovins en culture

RésuméIntroductionDurant l’inflammation intraoculaire, il a été rapporté par plusieurs auteurs une production importante de monoxyde d’azote (NO) avec la formation de peroxynitrite. Dans une étude antérieure, nous avions montré l’effet cytotoxique des nitrites et des nitrates, dérivés métaboliques stables du NO, sur les différents tissus formant les tuniques oculaires avec des degrés de sensibilité variables. La présente étude vise à situer l’effet du peroxynitrite, sur la totalité des explants oculaires bovins en culture.MéthodesDes yeux sains bovins, obtenus immédiatement après énucléation, ont été disséqués et les explants oculaires ont été prélevés de la partie antérieure et de la partie postérieure puis mis en culture dans du milieu minimum essentiel de Eagle (DMEM) additionné de sérum de veau fœtal, de 2 mM de L glutamine et d’antibiotiques. Les cultures ont été traitées avec le 3-morpholino-sydonimine N-éthyl-carbamide (SIN-1) (molécule génératrice de NO et de l’anion superoxyde O2.−) à des concentrations allant de 100 à 500 μM pendant 24 heures. Après incubation, les explants ont été fixés dans du formol tamponné à 10 % et une étude histologique a été entreprise.RésultatsLa majorité des structures a montré des altérations d’ordre tissulaire et cellulaire après incubation avec le donateur de peroxynitrite. Les différents tissus analysés ont répondu différemment selon les concentrations utilisées. Ces observations traduisent une sensibilité variable et dépendante de la concentration. Les épithéliums (cornée, procès ciliaires et iris) ont montré une haute sensibilité en comparaison à la sclérotique qui a développé une plus grande résistance.ConclusionNos résultats dans leur ensemble indiquent que le peroxynitrite induit des effets délétères sur les structures oculaires in vitro. Cet effet est proportionnel à la concentration utilisée. Nos résultats corroborent ceux rapportés par d’autres équipes et suggèrent le rôle du peroxynitrite produit du NO dans les lésions oculaires observées durant les uvéites.

SummaryIntroductionSeveral studies have reported a significant production of nitric oxide (NO) with peroxynitrite formation in the setting of intraocular inflammation. In a previous study, we showed the cytotoxic effect of nitrites and nitrates, stable metabolites of NO, on the various tissues forming the layers of the eye, with variable degrees of tissue sensitivity. This study aims to investigate the effect of peroxynitrite on whole ocular bovine explants in culture.MethodsHealthy ocular bovine eyes, obtained immediately upon enucleation, were dissected and samples were taken from the anterior and posterior segments, and then cultured in DMEM supplemented with 10% fetal bovine serum, 2 mM L-glutamine and antibiotics. Cultures were treated with 3-morpholino-sydonimin N-ethyl-carbamide (SIN-1) (molecule which produces NO and superoxide anion O2.−) at varying concentrations (100 to 500 μM) over 24 hours. After incubation, the explants were fixed in 10% buffered formalin, and histological study was performed.ResultsMost of the structures showed changes on tissue and cellular levels after incubation with the peroxynitrite donor and various responses depending on the concentration used. These observations reflect variable concentration-dependent tissue sensitivity. The epithelia (cornea, iris and ciliary process) showed high sensitivity in comparison with sclera, which developed greater resistance.ConclusionIn all, our results indicate a deleterious effect of peroxynitrite on bovine ocular structures in vitro. This effect is proportional to the concentration used. These results corroborate those reported by other teams and suggest the role of peroxynitrite derived from NO in the ocular lesions observed in the setting of uveitis.