کد مقاله | کد نشریه | سال انتشار | مقاله انگلیسی | نسخه تمام متن |
---|---|---|---|---|
2199580 | 1099599 | 2015 | 10 صفحه PDF | دانلود رایگان |
عنوان انگلیسی مقاله ISI
Preparation and characterization of a stable BHK-21 cell line constitutively expressing the Schmallenberg virus nucleocapsid protein
دانلود مقاله + سفارش ترجمه
دانلود مقاله ISI انگلیسی
رایگان برای ایرانیان
کلمات کلیدی
Nucleocapsid (N) proteinTRITCBHK-21 cellsnucleocapsidRT-PCRPBSTMCsHRPIFAeGFPSbVIgGRRT-PCRFBSmAbDMEMPBSNi–NTADulbecco's modified Eagle's medium - Medal of Eagle اصلاح شده DulbeccoPBS containing 0.05% Tween 20 - PBS حاوی 0.05٪ Tween 20SDS–PAGE - SDS-PAGEindirect immunofluorescence assay - آزمایش ایمنی فلوئورسانس غیر مستقیمcycle threshold - آستانه چرخهMonoclonal antibody - آنتی بادی مونوکلونالSodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis - الکتروفورز ژل پلی اتیل آمید سدیم دودسیل سولفاتimmunoglobulin G - ایمونوگلوبولین GLentivirus vector - بردار Lentivirustetramethylrhodamine isothiocyanate - تترامتییل رودامین ایزوتیوسیاناتEnzyme-linked immunosorbent assay - تست الیزاELISA - تست الیزاHIS - خودReal-time RT-PCR - زمان واقعی RT-PCRMultiple cloning sites - سایت های کلونینگ چندگانهfetal bovine serum - سرم جنین گاوPhosphate-buffered saline - محلول نمک فسفات با خاصیت بافریNickel Nitrilotriacetic acid - نیکل اسید نیتریلوتوریکاتیکhistidine - هیستیدینreverse transcription polymerase chain reaction - واکنش زنجیره ای پلیمراز رونویسی معکوسSchmallenberg virus - ویروس SchmallenbergHorseradish peroxidase - پراکسیداز هوررادیشenhanced green fluorescent protein - پروتئین فلورسنت سبز افزایش یافته است
موضوعات مرتبط
علوم زیستی و بیوفناوری
بیوشیمی، ژنتیک و زیست شناسی مولکولی
بیولوژی سلول
پیش نمایش صفحه اول مقاله
چکیده انگلیسی
Schmallenberg virus (SBV) is a newly emerged orthobunyavirus that predominantly infects livestock such as cattle, sheep, and goats. Its nucleocapsid (N) protein is an ideal target antigen for SBV diagnosis. In this study, a stable BHK-21 cell line, BHK-21-EGFP-SBV-N, constitutively expressing the SBV N protein was obtained using a lentivector-mediated gene transfer system combined with puromycin selection. To facilitate the purification of recombinant SBV N protein, the coding sequence for a hexa-histidine tag was introduced into the C-terminus of the SBV N gene during construction of the recombinant lentivirus vector pLV-EGFP-SBV-N. The BHK-21-EGFP-SBV-N cell line was demonstrated to spontaneously emit strong enhanced green fluorescent protein (EGFP) signals that exhibited a discrete punctate distribution throughout the cytoplasm. SBV N mRNA and protein expression in this cell line were detected by real-time RT-PCR and western blot, respectively. The expressed recombinant SBV N protein carried an N-terminal EGFP tag, and was successfully purified using Ni-NTA agarose by means of its C-terminal His tag. The purified SBV N protein could be recognized by SBV antisera and an anti-SBV monoclonal antibody (mAb) 2C8 in an indirect enzyme-linked immunosorbent assay and western blot analyses. Indirect immunofluorescence assays further demonstrated that the stable cell line reacts with SBV antisera and mAb 2C8. These results suggest that the generated cell line has the potential to be used in the serological diagnosis of SBV.
ناشر
Database: Elsevier - ScienceDirect (ساینس دایرکت)
Journal: Molecular and Cellular Probes - Volume 29, Issue 4, August 2015, Pages 244-253
Journal: Molecular and Cellular Probes - Volume 29, Issue 4, August 2015, Pages 244-253
نویسندگان
Yongning Zhang, Shaoqiang Wu, Shanshan Song, Jizhou Lv, Chunyan Feng, Xiangmei Lin,