Expression of biologically active recombinant equine interferon-γ in Escherichia coli

RésuméL’interféron gamma (IFN-γ) est une cytokine pléiotropique qui est reconnue comme étant un important modulateur de la réponse immunitaire. Jusqu&a présent, il n’avait pas été rapporte que des IFN-γ dérivés de cellules procaryotes équines recombinées ont une activité antivirale. Dans ce rapport, le gène codant pour la protéine mature équine de l’IFN-γ (EIFN-γ) a été cloné a l intérieur du plasmide pET-28a (+) et la protéine recombinante EIFN-γ a été exprimée dans Escherichia coli (E. coli). L’activité antivirale de la protéine recombinante exprimée EIFN-γ a été évaluée en utilisant le système des virus recombinants des vésicules stomatiques exprimant une protéine à fluorescence verte (rVSV-GFP) dans la 78ième lignée cellulaire de rein fœtal équin (EFK-78). L’expression de la GFP dans les cellules EFK-78 diminue de manière spectaculaire dans les cellules traitées avec EIFN-γ et en fonction de la dose utilisée par comparaison avec les cellules témoins. Le titre de l’activité antivirale était de 1 × 103 AU/ml. Ces ré sultats ont démontré que l EIFN-γ exprimée lors de cette étude avait une bonne activité biologique. Des formes pures et des quantités suffisantes d IFN-γ biologiquement actives, pourraient faciliter l’étude de l activité modulatrice de la réponse immunitaire à la fois in vivo et in vitro.

Interferon gamma (IFN-γ) is a pleiotropic cytokine that is recognized as an important modulator of the immune response. To date, there is no report that prokaryocyte-derived recombinant equine IFN-γ has antiviral activity. In this report, the gene coding equine IFN-γ (EIFN-γ) mature protein was cloned into pET-28a (+) and the recombinant EIFN-γ was expressed in Escherichia coli (E. coli). The antiviral activity of expressed recombinant EIFN-γ was evaluated by using a recombinant Vesicular Stomatits Virus expressing green fluorescence protein (rVSV-GFP) system in the equine fetal kidney-78 cell line (EFK-78). The GFP expression in the EFK-78 cells dramatically decreased in the cells treated with EIFN-γ in a dose-dependent manner, comparing with the mock-treated cells. The titer of antiviral activity was 1 × 103 AU/ml. These results demonstrated that the EIFN-γ expressed in this study had good biological activity. Pure forms and sufficient quantities of biologically active IFN-γ could facilitate the study of its activities in modulating immune responses both in vivo and in vitro.