Cloning and expression of chicken anemia virus VP3 protein in Escherichia coli

Purification of chicken anemia virus (CAV) VP3 protein, expressed in a prokaryotic expression system as histidine-tagged fusion protein is demonstrated in the present study. CAV particle was obtained from infected liver of chicken and DNA was extracted. The VP3 protein gene was amplified from the extracted DNA by polymerase chain reaction (PCR) and cloned. The recombinant expression construct (pTrc-VP3) was identified by PCR and sequencing analysis. Expression of VP3 protein with a molecular mass of approximately 21 kDa was confirmed by Western blotting analysis with CAV-specific antibodies. The in vitro expressed VP3 protein was purified to near homogeneity by elution from the gel, as judged by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis analysis. The purified VP3 protein was recognized by CAV antibodies in a Western blotting assay. This finding indicates that recombinant VP3 expressed in the pTrcHis2 vector system can be used as antigen to detect anti-CAV antibodies.

RésuméLa purification de la protéine VP3 du virus de l’anémie des poules (CAV), exprimée dans un système d’expression procaryotique est démontrée dans cette étude. La particule de CAV est obtenue à partir du foie de poule infecté, et l′ADN a été extrait. Le gène de la protéine VP3 a été amplifié à partir de l′ADN extrait, par PCR et cloné. Le produit de recombinaison de l’expression (pTrc-VP3) a été identifié par PCR et séquençage. L’expression de la protéine de fusion VP3 de poids moléculaire approximativement de 21 kDa, a été déterminée par la technique de Western blott. Par élution du gel, la protéine VP3 a été purifiée avec homogénéité, et passée sur gel de polyacrilamide dodecyl sulfate de sodium. La protéine VP3 purifiée a été reconnue par des anticorps de CAV par la méthode Western blott. Ce résultat indique que la protéine VP3 de recombinaison exprimée dans le système du vecteur pTrcHis2 peut être utilisée comme antigène pour détecter des anticorps contre CAV.