Two specific sites for binding of K88ab Escherichia coli fimbriae to porcine intestinal brush border membranes

We have studied the characteristics of the binding of the K88ab Escherichia coli fimbrial antigen to porcine brush border membranes by solid phase binding assay. Binding of biotinylated K88ab to brush border membranes followed a sigmoidal dependence and was saturable, apparent saturation occurring with 0.8 ng of fimbriae (approx. 7 ng of fimbriae per μg of brush border protein) irrespective of incubation temperature in the range of room temperature to 4 °C. A Hill plot of log [(fimbriae bound)/(maximal binding-fimbriae bound)] vs. log free fimbriae gave a maximal slope of about 2, indicating the existence of two binding sites.From an analysis of an Scatchard plot, apparent binding constants 1K2 and 2K2 of 7.1×108 and 17.1×108 M−1 were obtained at room temperature.Nor did temperature have any effect on the rate of binding or on receptor affinity (S0.5).

RésuméPar le test d’union en phase solide, nous avons étudié les caractéristiques de l’union de les fimbriae K88ab d’Escherichia coli aux membranes des entérocytes porcins. L’union de K88ab aux membranes, après biotinilitation, a suivi une dépendance sigmoidale et elle a été saturable. La saturation apparente est arrivée avec 0,8 ng de fimbriae (approximativement 7 ng de fimbriae par microgramme de protéine de membrane). Un graphique de Hill du logarithme [(fimbria unie)/(maximale union-fimbria unie)] versus logarithme de la fimbria libre, a donné un indicateur maximal d’environ 2, en indiquant l’existence de deux lieu d’union.Après d’un graphique de Scatchard , les constantes apparentes d’union 1K2 et 2K2 qui ont été obtenues avec la température ambiante, étaient de 7,1×108 et 17,1×108 M−1. La température n’avait pas d’effet dans le taux d’union ou dans la affinité du récepteur (S0.5).