Development of an Optimal Protocol for the Proteomic Analysis of Stenotic and Healthy Aortic Valves

Introduction and objectivesFor many years, degenerative aortic stenosis was thought to be a passive process secondary to calcium deposition in aortic valves. Although its etiology remains unknown, several authors have pointed out that degenerative aortic stenosis is associated with the same risk factors as coronary artery disease. Furthermore, histological similarities have been found between aortic valve stenosis and atherosclerotic plaque, giving rise to the hypothesis that degenerative aortic stenosis is an inflammatory process similar to atherosclerosis. Nevertheless, some data do not fit with this hypothesis and, consequently, greater understanding of the condition is needed. The main aim of this study was to develop a practical protocol for extracting protein for use in proteomic analysis from both stenotic and healthy aortic valves.MethodsThe study was carried out using a number of different proteomic methods: two-dimensional electrophoresis, mass spectrometry, and additional techniques.ResultsWe developed a simple and reproducible methodology in the laboratory for carrying out the proteomic analysis of human aortic valves and for identifying their component proteins.ConclusionsWe developed a simple and reproducible method for extracting protein that can be used with mass spectrometry and that makes it possible to carry out large-scale proteomic analysis of stenotic aortic valves. Furthermore, the methodology will significantly increase our understanding of the valve proteome.

Introducción y objetivosDurante años, la estenosis aórtica (EA) degenerativa ha sido considerada como un proceso pasivo secundario al depósito de calcio en la válvula aórtica. Aunque no se conoce su etiología, diversos autores han señalado que comparte los mismos factores de riesgo que la enfermedad arterial coronaria. Además, se han encontrado similitudes histológicas en la válvula aórtica estenótica y la placa de ateroma, lo que ha llevado a la hipótesis de que la EA degenerativa es un proceso inflamatorio similar a la aterosclerosis. No obstante, existen algunos datos discordantes con esta teoría, lo que hace necesario profundizar en el conocimiento de esta patología. El principal objetivo de este trabajo es la puesta a punto de un protocolo de extracción proteínica eficaz para válvulas estenóticas aórticas y válvulas aórticas sanas, compatible con la realización de estudios proteómicos.MétodosPara el desarrollo del objetivo planteado, se han utilizado diferentes abordajes proteómicos: electroforesis bidimensional, espectrometría de masas y técnicas complementarias.ResultadosHemos puesto a punto una metodología, sencilla, reproducible y desarrollada en el laboratorio, que permite el análisis proteómico de la válvula aórtica humana, así como la identificación de las proteínas que las componen.ConclusionesObtención de un método de extracción de proteínas sencillo, reproducible y compatible con la espectrometría de masas, que permite el análisis a gran escala del proteoma de válvulas con estenosis aórtica. Además, esta metodología aumentará de forma significativa nuestro conocimiento del proteoma valvular.