کد مقاله | کد نشریه | سال انتشار | مقاله انگلیسی | نسخه تمام متن |
---|---|---|---|---|
7558022 | 1491357 | 2015 | 7 صفحه PDF | دانلود رایگان |
عنوان انگلیسی مقاله ISI
Click chemistry armed enzyme-linked immunosorbent assay to measure palmitoylation by hedgehog acyltransferase
ترجمه فارسی عنوان
برای بررسی میزان ایمونوسیورسنت آنزیم مسلح شیمیایی با استفاده از اتیل ترانسفراز ساحلی
دانلود مقاله + سفارش ترجمه
دانلود مقاله ISI انگلیسی
رایگان برای ایرانیان
کلمات کلیدی
COAOTGtris[(1-benzyl-1H-1,2,3-triazol-4-yl)methyl]aminen-dodecyl β-d-maltopyranosideTBTAGhrelin-O-acyltransferaseMBOATPAGEHRPn-octyl β-d-glucopyranosidePTMDDMSDSHTSPBS3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate - 3 - [(3-کلامیدوپروپیل) دی متیل آمونیو] -1-پروپان سولفوناتBSA - BSAtris(2-carboxyethyl)phosphine - tris (2-carboxyethyl) فسفینbovine serum albumin - آلبومین سرم گاوposttranslational modification - اصلاح posttranslationalpolyacrylamide gel electrophoresis - الکتروفورز ژل پلی آکریل آمیدGoat - بزHedgehog - جوجهتیغی، خارپشتShh - خیرRoom temperature - دمای اتاقTCEP - ساکتsodium dodecyl sulfate - سدیم دودسیل سولفاتClick chemistry - شیمی کلیکsonic hedgehog - صدای جیر جیرhigh-throughput screen - صفحه نمایش با قدرت بالاPhosphate-buffered saline - محلول نمک فسفات با خاصیت بافریpolymerase chain reaction - واکنش زنجیره ای پلیمرازPCR - واکنش زنجیرهٔ پلیمرازHorseradish peroxidase - پراکسیداز هوررادیشProtein palmitoylation - پروتئین palmitoylationCHAPS - چاپسcoenzyme A - کوآنزیم A
موضوعات مرتبط
مهندسی و علوم پایه
شیمی
شیمی آنالیزی یا شیمی تجزیه
چکیده انگلیسی
Hedgehog signaling is critical for correct embryogenesis and tissue development. However, on maturation, signaling is also found to be aberrantly activated in many cancers. Palmitoylation of the secreted signaling protein sonic hedgehog (Shh) by the enzyme hedgehog acyltransferase (Hhat) is required for functional signaling. To quantify this important posttranslational modification, many in vitro Shh palmitoylation assays employ radiolabeled fatty acids, which have limitations in terms of cost and safety. Here we present a click chemistry armed enzyme-linked immunosorbent assay (click-ELISA) for assessment of Hhat activity through acylation of biotinylated Shh peptide with an alkyne-tagged palmitoyl-CoA (coenzyme A) analogue. Click chemistry functionalization of the alkyne tag with azido-FLAG peptide allows analysis through an ELISA protocol and colorimetric readout. This assay format identified the detergent n-dodecyl β-d-maltopyranoside as an improved solubilizing agent for Hhat activity. Quantification of the potency of RU-SKI small molecule Hhat inhibitors by click-ELISA indicated IC50 values in the low- or sub-micromolar range. A stopped assay format was also employed that allows measurement of Hhat kinetic parameters where saturating substrate concentrations exceed the binding capacity of the streptavidin-coated plate. Therefore, click-ELISA represents a nonradioactive method for assessing protein palmitoylation in vitro that is readily expandable to other classes of protein lipidation.
ناشر
Database: Elsevier - ScienceDirect (ساینس دایرکت)
Journal: Analytical Biochemistry - Volume 490, 1 December 2015, Pages 66-72
Journal: Analytical Biochemistry - Volume 490, 1 December 2015, Pages 66-72
نویسندگان
Thomas Lanyon-Hogg, Naoko Masumoto, George Bodakh, Antonio D. Konitsiotis, Emmanuelle Thinon, Ursula R. Rodgers, Raymond J. Owens, Anthony I. Magee, Edward W. Tate,