Monitoring the interaction between DNA and a transcription factor (MEF2A) using fluorescence correlation spectroscopy

La spectroscopie à corrélation de fluorescence (FCS) est une méthode qui permet de distinguer en solution plusieurs populations de molécules fluorescentes et d'estimer leurs concentrations et leurs constantes de diffusion. La FCS a été utilisée pour caractériser l'interaction entre un facteur de transcription (MEF2A) et sa séquence cible sur l'ADN. Le facteur de transcription MEF2 Myocyte enhancer factor 2 appartient à la famille des protéines à MADS-box et active la transcription de plusieurs gènes musculaires pendant la myogenèse. Des mesures FCS ont été réalisées sur des oligonucléotides double brin marqués au TAMRA et correspondant à la séquence consensuelle (WT) ou mutée (Mut) du site de liaison ADN/MEF2A. La liaison MEF2A sur son site d'interaction (WT) se traduit par un allongement significatif du temps de diffusion. La spécificité de l'interaction a été confirmée par l'utilisation de la séquence mutée (Mut). La FCS a permis d'évaluer le rapport libre/lié pour plusieurs concentrations de MEF2A et la constante de dissociation apparente KD. Pour citer cet article : G. Octobre et al., C. R. Biologies 328 (2005).