C35T mutation could slightly decrease the activity of human α-(1,2)-fucosyltransferase

Purpose of the studyThe C35T mutant α-(1,2)-fucosyltransferase (FUT1) gene had been reported related to the para-Bombay phenotype, but recently, our laboratory found that the C35T was a polymorphism in the Chinese population. This study aims at further clarifying the property of C35T mutant FUT1.Material and methodsThe mutant C35T FUT1 gene was cloned into expression vector in vitro, the mRNA expression was analyzed by real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR), and the mutant enzyme's activity was determined in vitro.ResultsThe results showed that the frequencies of 35C and 35T alleles were 0.735 and 0.265, respectively. The FUT1 mRNA level of transfected cells with C35T recombination vector showed 99.85% of the wild-type FUT1 transfected cells. The enzyme relative activity of transfected cell lysates with C35T FUT1 recombination vector was 79.45% compared with that of the wild-type FUT1 transfected cell lysates. The Kmphenyl-gal value of enzyme encoded by C35T allele was 0.5 times higher than that of the enzyme encoded by FUT1 wild-type allele.ConclusionThese results suggested that FUT1 C35T was a polymorphism in the Chinese population and did not affect its mRNA transcription, but could slightly decrease the activity of human α-(1,2)-fucosyltransferase in vitro.

RésuméBut de l’étudeL’allèle C35T du gène de α-(1,2)-fucosyltransférase (FUT1) a été associé au phénotype para-Bombay, mais récemment, nous avons montré que C35T est un polymorphisme retrouvé dans la population chinoise. Cette étude visait à clarifier les caractéristiques du variant C35T du gène FUT1.Matériel et méthodesLe mutant C35T FUT1 a été cloné dans des vecteurs d’expression, et l’expression des ARN messagers (ARNm) analysée par polymerase chain reaction (PCR) en temps réel. L’activité de l’enzyme mutée a été déterminée in vitro.RésultatsLes résultats ont montré que les fréquences des positions 35C et 35T étaient respectivement de 0,735 et 0,265. Le niveau d’ARNm des cellules transfectées avec le vecteur recombinant portant la mutation C35T était de 99,85 % du taux observé pour les cellules transfectées avec le type sauvage de FUT1. L’activité enzymatique relative des lysats de cellules transfectées avec le vecteur C35FUT1 était de 79,45 % par rapport aux cellules transfectées avec le vecteur FUT1 sauvage. La valeur du Kmphenyl-gal de l’enzyme codée par l’allèle C35T était 0,5 fois supérieure à celle codée par l’allèle sauvage de FUT1.ConclusionCes résultats suggèrent que C35T est un polymorphisme de FUT1 retrouvé dans la population chinoise qui affecte peu le niveau de transcription des ARNm, mais qui peut en revanche diminuer légèrement l’activité de l’enzyme humaine α-(1,2)-fucosyltransférase in vitro.