Cys shotgun labeling of macrophages adhering to and engulfing Ig-opsonized cells

A method is being developed to study cytoskeletal reorganization in cell adhesion processes. The initial model process is adhesion and phagocytosis of beads or red blood cells by macrophages. Live cell labeling with Cys reactive fluorophores is performed before and during phagocytosis with different color labeling dyes. Since Cys is a relatively hydrophobic amino acid, its differential exposure and labeling in principle reflects changes in tertiary or quaternary structure of specific proteins. Similar studies conducted on red blood cells under fluid shear conditions showed that specific domains in spectrin undergo extensible unfolding within sheared cells. The initial work here with macrophages also suggests some structural changes in phagocytosis although the proteins and specific sites have yet to be identified.

RésuméNous développons une méthode d’étude de la réorganisation du cytosquelette dans les processus d’adhérence cellulaire. Nous utilisons comme modèle initial l’adhérence et la phagocytose de billes ou de globules rouges par des macrophages. Le marquage des cellules vivantes avec des fluorophores réagissant avec des cystéines est effectué avant et pendant la phagocytose avec des couleurs différentes. Comme la cystéine est un acide aminé relativement hydrophobe, son exposition aux fluorophores et le marquage différentiel reflète en principe des changements dans la structure tertiaire ou quaternaire de certaines protéines. Des études similaires menées avec des globules rouges soumis à des conditions de cisaillement en flux ont montré que des domaines spécifiques de la spectrine subissent un déploiement important dans ces cellules. Ce travail initial avec les macrophages, suggère que des changements de structure surviennent lors de la phagocytose, bien que les protéines et les sites spécifiques concernés restent encore à identifier.