Maîtrise des tolérances métrologiques : application à la recherche des anticorps anti-érythrocytaires (RAI) en test indirect à l'antiglobuline (TIA) et au groupage sanguin ABO par les procédés de filtration et en microplaque

RésuméDans le cadre de l'accréditation Cofrac, il convient de valider les méthodes utilisées en immunohématologie. Cela impose de connaître les tolérances métrologiques des différentes techniques. Deux études multicentriques, concernant la recherche d'anticorps antiérythrocytaires (RAI) en test indirect à l'antiglobuline et le groupage ABO en technique manuelle, ont été réalisées pour définir les écarts maximums tolérables vis-à-vis des températures et durée d'incubation ainsi que des volumes de réactants. Ces études ont nécessité l'emploi de matériels étalonnés Cofrac (incubateur, thermomètre, pipettes…). La RAI a été réalisée vis-à-vis de différents supports de filtration ID Diamed, Biovue Ortho and Scangel Biorad, avec la même gamme d'hématies test, un standard anti-RH1 calibré à 20 ng, un témoin positif anti-KEL1 et un témoin négatif. L'épreuve plasmatique du groupage ABO a été réalisée en filtration et en microplaque avec les mêmes hématies test A1 et B. Ces deux études appliquées à la RAI et au groupage ABO montrent que les résultats sont strictement identiques quelles que soient les combinaisons des quatre paramètres critiques précités et permettent de définir les écarts maximums tolérables (EMT).

According to requirements of the French Committee for Accreditation (Cofrac), it is essential to use validated and standardised methods in Immunohematology. This imposes first the knowledge of metrological tolerances for all the technics. Two multicenter studies were carried out to define the maximal acceptable deviations concerning incubation temperature and time, volumes of patient plasma and tests cells for antibody screening using indirect antiglobulin test on one hand and for reverse grouping on another hand. All equipment used (temperature test chamber, chronometer, pipettes) were calibrated according to Cofrac standards. The antibody screenings were performed manually using 3 different filtration systems: ID Diamed, Biovue Ortho and Scangel Biorad, the same tests cells, a standard 20 ng/mL anti RH1, a positive control anti KEL1 and a negative control; the reverse blood grouping was performed manually using the above mentionned filtration systems and microplate technic with the same A1 and B test cells. These two studies showed that all the tests from the multiples combinations of the above parameters gave the same results and allowed us to define a range of tolerance for 4 critical physical parameters involved in the antibody screening and blood typing.