کد مقاله | کد نشریه | سال انتشار | مقاله انگلیسی | نسخه تمام متن |
---|---|---|---|---|
1172913 | 1491351 | 2016 | 7 صفحه PDF | دانلود رایگان |
عنوان انگلیسی مقاله ISI
A continuous spectrophotometric enzyme-coupled assay for deoxynucleoside triphosphate triphosphohydrolases
ترجمه فارسی عنوان
یک آزمون آنزیم اسپکتروفتومتری مستمر برای دیوکسینوکلئوزید تری فسفات تری فسفو هیدرولاز
دانلود مقاله + سفارش ترجمه
دانلود مقاله ISI انگلیسی
رایگان برای ایرانیان
کلمات کلیدی
DGTPPPiEnzyme-coupled assayPNPaseXODNDPKXanthine oxidase - زانتین اکسیداز8-oxoguanine - 8-اکسوگوینینAlkaline phosphatase - آلکالین فسفاتاز یا فسفاتاز قلیاییEDTA - اتیلن دی آمین تترا استیک اسید Ethylenediaminetetraacetic acid - اتیلینیدامین تتراستیک اسیدUltraviolet - اشعه فرابنفشTripolyphosphate - تری پلی فسفاتNucleoside diphosphate kinase - دی اکسید کیناز دی اکسید کربنinorganic phosphate - فسفات معدنیPurine nucleoside phosphorylase - پورین نوکلئوزید فسفوریلاhigh-performance liquid chromatography - کروماتوگرافی مایعی کاراHPLC - کروماتوگرافی مایعی کارا
موضوعات مرتبط
مهندسی و علوم پایه
شیمی
شیمی آنالیزی یا شیمی تجزیه
چکیده انگلیسی
We describe a continuous, spectrophotometric, enzyme-coupled assay useful to monitor reactions catalyzed by nucleoside triphosphohydrolases. In particular, using Escherichia coli deoxynucleoside triphosphohydrolase (Dgt), which hydrolyzes dGTP to deoxyguanosine and tripolyphosphate (PPPi) as the enzyme to be tested, we devised a procedure relying on purine nucleoside phosphorylase (PNPase) and xanthine oxidase (XOD) as the auxiliary enzymes. The deoxyguanosine released by Dgt can indeed be conveniently subjected to phosphorolysis by PNPase, yielding deoxyribose-1-phosphate and guanine, which in turn can be oxidized to 8-oxoguanine by XOD. By this means, it was possible to continuously detect Dgt activity at 297Â nm, at which wavelength the difference between the molar extinction coefficients of 8-oxoguanine (8000Â Mâ1Â cmâ1) and guanine (1090Â Mâ1Â cmâ1) is maximal. The initial velocities of Dgt-catalyzed reactions were then determined in parallel with the enzyme-coupled assay and with a discontinuous high-performance liquid chromatography (HPLC) method able to selectively detect deoxyguanosine. Under appropriate conditions of excess auxiliary enzymes, the activities determined with our continuous enzyme-coupled assay were quantitatively comparable to those observed with the HPLC method. Moreover, the enzyme-coupled assay proved to be more sensitive than the chromatographic procedure, permitting reliable detection of Dgt activity at low dGTP substrate concentrations.
ناشر
Database: Elsevier - ScienceDirect (ساینس دایرکت)
Journal: Analytical Biochemistry - Volume 496, 1 March 2016, Pages 43-49
Journal: Analytical Biochemistry - Volume 496, 1 March 2016, Pages 43-49
نویسندگان
Deepa Singh, Roel M. Schaaper, Alejandro Hochkoeppler,