کد مقاله کد نشریه سال انتشار مقاله انگلیسی نسخه تمام متن
2020703 1069200 2013 6 صفحه PDF دانلود رایگان
عنوان انگلیسی مقاله ISI
Expression, purification, and functional characterization of an N-terminal fragment of the tomato mosaic virus resistance protein Tm-1
ترجمه فارسی عنوان
کلمات کلیدی
فهرست مطالب مقاله
چکیده

مقدمه

شکل 1. شماتیک از ساختار دامنه Tm-1 پیش بینی شده توسط NCBI پایگاه داده دامنه محافظت شده. موقعیت رزیدو 431 با پیکان نشان داده می شود

مواد و روش ها

سازه های پلاسمید

بیانTm-1(431)

خالص سازی Tm-1(431)

اندازه گیری پراکندگی نور دینامیک5 (DLS) 

نتایج

بهینه سازی شرایط بیان MBP-Tm-1(431) 

خالص سازی و خصوصیات Tm-1(431)

شکل 2. ژل SDS-PAGE از لیزات های E. coli و پروفیل های فیلتراسیون ژل MBP-Tm-1(431)  که در دماهای مختلف بیان می شود. (A) لیزات که با فراصوت گرفته شد.

شکل 3. خلوص Tm-1 (431) . (A) پروتکل تصفیه Tm-1 (431). (B) ژل SDS-PAGE رنگ آبی درخشان Coomassie ، از پروتئین های موجود در بخش های دوباره به دست آمده در طول خالص سازی.

بحث

شکل 4. خصوصیات Tm-1 (431) خالص

 
ترجمه چکیده
Tm-1 ، محصول پروتئینی Tm-1 ، یک ژن مقاومت نیمه غالب گوجه فرنگی، با اتصال به پروتئین های همانندسازی ToMV ، از تکثیر ویروس موزاییک گوجه فرنگی (ToMV) جلوگیری می کند. مطالعات قبلی اهمیت منطقه ترمینال N،Tm-1 برای عملکرد مهاری آن را نشان می دهند. هرچند، مشخص نشده است که آیا منطقه ترمینال N برای مهار کافی است یا خیر. علاوه بر این، ساختار سه بعدی Tm-1 تعیین نشده است. در این مطالعه، یک قطعه ترمینال N از Tm-1 (رزیدو4 1-431) به عنوان یک پروتئین همجوشی حاوی یک پروتئین اتصال دهنده مالتوز بالایی، در سلول های E. coli Rosetta (DE3) در 30 درجه سانتیگراد بیان شده و سپس خالص سازی شد. حلالیت پروتئین همجوشی، زمانی که سلول ها در 30 درجه سانتیگراد کشت داده شد از وقتی که در دمای پایین یا بالاتر کشت می شوند، بیشتر بود. قطعه خالص سازی شده ی ترمینال N، Tm-1 که برچسب پروتئین اتصال دهنده به مالتوز از آن برداشته شده است، دارای عملکرد مهارکنندگی در برابر تکثیر RNA ToMV است. حق چاپ 2013 منتشر شده توسط Elsevier Inc. کلیه حقوق محفوظ است.
موضوعات مرتبط
علوم زیستی و بیوفناوری بیوشیمی، ژنتیک و زیست شناسی مولکولی زیست شیمی
پیش نمایش مقاله
چکیده انگلیسی

Tm-1, the protein product of Tm-1, a semidominant resistance gene of tomato, inhibits tomato mosaic virus (ToMV) replication by binding to ToMV replication proteins. Previous studies suggested the importance of the Tm-1 N-terminal region for its inhibitory activity; however, it has not been determined if the N-terminal region is sufficient for inhibition. Furthermore, the three-dimensional structure of Tm-1 has not been determined. In this study, an N-terminal fragment of Tm-1 (residues 1–431) as a fusion protein containing an upstream maltose-binding protein was expressed in E. coli Rosetta (DE3) cells at 30 °C and then purified. The solubility of the fusion protein was greater when the cells were cultured at 30 °C than when cultured at lower or higher temperatures. The purified N-terminal Tm-1 fragment from which the maltose-binding protein tag had been removed has inhibitory activity against ToMV RNA replication.


► A fusion protein containing the maltose-binding protein and an N-terminal region of Tm-1 was expressed in Escherichia coli.
► The solubility of the protein was greatly influenced by the induction temperature.
► The purified fragment is likely a homodimer and inhibits ToMV RNA replication.

ناشر
Database: Elsevier - ScienceDirect (ساینس دایرکت)
Journal: Protein Expression and Purification - Volume 89, Issue 1, May 2013, Pages 1–6
نویسندگان
, , , , ,