کد مقاله کد نشریه سال انتشار مقاله انگلیسی نسخه تمام متن
2021003 1542351 2010 5 صفحه PDF دانلود رایگان
عنوان انگلیسی مقاله ISI
Production of recombinant anthrax toxin receptor (ATR/CMG2) fused with human Fc in planta
ترجمه فارسی عنوان
تولید پروتئین نوترکیب گیرنده ی توکسین سیاه زخم (ATR/CMG2) الحاقی به FC انسانی به روش in planta
کلمات کلیدی
بیوتکنولوژی گیاهی، الحاق Fc نوترکیب، ایمنوادهسین، غیرفعال کردن سم آنتراکس، توتون تراریخت
فهرست مطالب مقاله
چکیده

کلمات کلیدی

مقدمه

مواد و روش ها:

مهندسی ژنتیک الحاق کدون بهینه شده ATR-Fc گیاهی 

انتقال به گیاه

جداسازی و خالص سازی پروتئین های نوترکیب

تجزیه و تحلیل پروتئین

سنجش میل ترکیبی  به روش pull down

آنالیز pATR-Fc اتصال یافته به PA83 با استفاده از آزمون ساندویچ الایزا

سنجش غیر فعال کردن درون آزمایشگاهی

نتایج

سازه های ATR-Fc برای انتقال گیاهی پایدار و بیان هدفمند 

گیاهان تراریخت تولید کننده ی پروتئین الحاقی pATR-Fc

جداسازی و خالص سازی pATR-Fc در شکل محلول

اتصال اختصاصی pATR-Fc به PA83

بررسی آزمایشگاهی حفاظت سلول های ماکروفاژ در برابر توکسین ناشی از سیاه زخم با استفاده ATR-Fc مشتق شده از گیاه

تقدیر و تشکر
ترجمه چکیده
واکسیناسیون گسترده در برابر سیاه زخم با استفاده از واکسن های موجود، به دلیل اثرات جانبی احتمالی، هزینه بر و خطرناک است. برای تیمار پس از آلودگی ، روش های ایمن درمانی غیرفعال در دسترس هستند که اغلب مبتنی بر آنتی ژن حفاظتی سیاه زخم (PA) - آنتی بادی های درمانی اختصاصی هستند. اگرچه این روش در برابر استرین های وحشی به طور موثری عمل می نماید، اما ممکن است در برابر عفونت ناشی از استرین های تغییر یافته ژنتیکی از Bacillus anthracis آسیب پذیر باشد. کشف اخیر نشان داده است که دومین فاکتور A فون ویلبراند (VWA) در پروتئین ریخت زایی مویرگی انسانی (CMG2) یکی از گیرنده های کارامد توکسین سیاه زخم (ATR) برای حل این مساله می باشد. در تحقیق حاضر، تولید پروتئین نوترکیب شیمیری (ایمونوادهسین ) به روش in planta متشکل از دومین های عملکردی ATR که با قطعه ی Fc ایمونوگلوبولین انسانی (pATR-Fc) امتزاج یافته است، تشریح می شود. طراحی الحاق، امکان دستیابی به pATR-Fc در بافت سبز گیاهی در فرم محلول را فراهم نمود که باعث سهولت خالص سازی کروماتوگرافی پروتئین A شد. سنجش های الایزا و وسترن بلات نشان داد که PATR-Fc بهینه شده (خلوص بیش از 90 درصد) به طور موثری به PA سیاه زخم متصل می شود. همچنین پروتئین نوترکیب PATR-Fc باعث حافظت از سلول های ماکروفاژ J774A1 در برابر توکسین های سیاه زخم می گردد. تحقیق حاضر نشان داد که پروتئین شبه آنتی بادی pATR-Fc گیاهی، می تواند روش موثری برای ایمونوتراپی سیاه زخم باشد.
موضوعات مرتبط
علوم زیستی و بیوفناوری بیوشیمی، ژنتیک و زیست شناسی مولکولی زیست شیمی
پیش نمایش مقاله
تولید پروتئین نوترکیب گیرنده ی توکسین سیاه زخم (ATR/CMG2) الحاقی به FC انسانی به روش in planta
چکیده انگلیسی

Mass vaccination against anthrax with existing vaccines is costly and unsafe due to potential side effects. For post-infection treatment, passive immunotherapy measures are currently available, most based on anthrax protective antigen (PA)-specific therapeutic antibodies. Efficient against wild-type strains, these treatment(s) might fail to protect against infections caused by genetically engineered Bacillus anthracis strains. A recent discovery revealed that the von Willebrand factor A (VWA) domain of human capillary morphogenesis protein 2 (CMG2) is an exceptionally effective anthrax toxin receptor (ATR) proficient in helping to resolve this issue.Here we describe in planta production of chimeric recombinant protein (immunoadhesin) comprised of functional ATR domain fused with the human immunoglobulin Fc fragment (pATR-Fc). The fusion design allowed us to obtain pATR-Fc in plant green tissues in a soluble form making it fairly easy to purify by Protein-A chromatography. Standardized pATR-Fc preparations (purity > 90%) were shown to efficiently bind anthrax PA as demonstrated by ELISA and Western blot analysis. Recombinant pATR-Fc was also shown to protect J774A1 macrophage cells against the anthrax toxin. This study confirmed that plant-derived pATR-Fc antibody-like protein is a prospective candidate for anthrax immunotherapy.

ناشر
Database: Elsevier - ScienceDirect (ساینس دایرکت)
Journal: Protein Expression and Purification - Volume 70, Issue 2, April 2010, Pages 158–162
نویسندگان
, , , , , , ,