کد مقاله | کد نشریه | سال انتشار | مقاله انگلیسی | نسخه تمام متن |
---|---|---|---|---|
2021003 | 1542351 | 2010 | 5 صفحه PDF | دانلود رایگان |
کلمات کلیدی
مقدمه
مواد و روش ها:
مهندسی ژنتیک الحاق کدون بهینه شده ATR-Fc گیاهی
انتقال به گیاه
جداسازی و خالص سازی پروتئین های نوترکیب
تجزیه و تحلیل پروتئین
سنجش میل ترکیبی به روش pull down
آنالیز pATR-Fc اتصال یافته به PA83 با استفاده از آزمون ساندویچ الایزا
سنجش غیر فعال کردن درون آزمایشگاهی
نتایج
سازه های ATR-Fc برای انتقال گیاهی پایدار و بیان هدفمند
گیاهان تراریخت تولید کننده ی پروتئین الحاقی pATR-Fc
جداسازی و خالص سازی pATR-Fc در شکل محلول
اتصال اختصاصی pATR-Fc به PA83
بررسی آزمایشگاهی حفاظت سلول های ماکروفاژ در برابر توکسین ناشی از سیاه زخم با استفاده ATR-Fc مشتق شده از گیاه
تقدیر و تشکر
Mass vaccination against anthrax with existing vaccines is costly and unsafe due to potential side effects. For post-infection treatment, passive immunotherapy measures are currently available, most based on anthrax protective antigen (PA)-specific therapeutic antibodies. Efficient against wild-type strains, these treatment(s) might fail to protect against infections caused by genetically engineered Bacillus anthracis strains. A recent discovery revealed that the von Willebrand factor A (VWA) domain of human capillary morphogenesis protein 2 (CMG2) is an exceptionally effective anthrax toxin receptor (ATR) proficient in helping to resolve this issue.Here we describe in planta production of chimeric recombinant protein (immunoadhesin) comprised of functional ATR domain fused with the human immunoglobulin Fc fragment (pATR-Fc). The fusion design allowed us to obtain pATR-Fc in plant green tissues in a soluble form making it fairly easy to purify by Protein-A chromatography. Standardized pATR-Fc preparations (purity > 90%) were shown to efficiently bind anthrax PA as demonstrated by ELISA and Western blot analysis. Recombinant pATR-Fc was also shown to protect J774A1 macrophage cells against the anthrax toxin. This study confirmed that plant-derived pATR-Fc antibody-like protein is a prospective candidate for anthrax immunotherapy.
Journal: Protein Expression and Purification - Volume 70, Issue 2, April 2010, Pages 158–162