Effect of NF-κB decoy on insulin resistance of adipocytes from patients with type 2 diabetes mellitus

AimThis study aimed to investigate whether NF-κB contributes to insulin resistance in type 2 diabetes (T2DM).MethodsSubcutaneous abdominal adipose tissue was obtained from T2DM patients and non-diabetic control subjects. Pre-adipocytes were cultured and differentiated into adipocytes in vitro. Upon insulin stimulation, IRS-1 tyrosine and AKT (Ser473) phosphorylation were examined by immunoprecipitation and immunoblotting, while levels of inflammatory mediators IL-6 and MCP-1, and the DNA-binding activity of NF-κB, were examined by ELISA and electrophoretic mobility shift assay (EMSA), respectively. NF-κB decoy molecules were introduced into T2DM adipocytes, and their effects on all these molecular events evaluated.ResultsCompared with cells from non-diabetic subjects, adipocytes from T2DM patients showed signs of insulin resistance, with significantly reduced IRS-1 tyrosine and AKT (Ser 473) phosphorylation levels in response to insulin stimulation. At the same time, T2DM cells displayed elevated levels of IL-6 and MCP-1, and NF-κB activity. Introduction of NF-κB decoy molecules significantly inhibited both IL-6 secretion and NF-κB activity, while enhancing insulin-stimulated IRS-1 tyrosine and AKT (Ser473) phosphorylation in T2DM adipocytes.ConclusionAbdominal subcutaneous fat cells from T2DM patients display signs of insulin resistance and microinflammatory status. NF-κB decoy molecules inhibited NF-κB overactivation and also partly reversed insulin resistance. These results provide evidence of a link between inflammation and insulin resistance in T2DM cells, suggesting a potential contribution of inflammation to the mechanism of insulin resistance.

RésuméObjectifCette étude visait à déterminer si NF-κB contribuait à l’insulinorésistance observée dans le diabète de type 2 (DT2).MéthodesDu tissu adipeux sous-cutané abdominal a été prélevé chez des patients atteints de DT2 et des témoins non diabétiques. Les préadipocytes ont été cultivés et se sont différenciés en adipocytes in vitro. Dans des conditions de stimulation par l’insuline, la phosphorylation de la tyrosine d’IRS-1 et d’Akt-Ser 473 a été mesurée par immunoprécipitation et immunoblotting, les concentrations d’IL-6, de MCP-1 et l’activité de liaison à l’ADN de NF-κB ont été mesurées respectivement par Elisa et par Emsa. Les molécules-leurre pour NF-κB ont été introduites dans les adipocytes provenant des patients atteints de DT2 et leur effet sur l’ensemble des événements moléculaires a été évalué.RésultatsEn comparaison avec les adipocytes des patients non diabétiques, les adipocytes des DT2 présentaient des signes d’insulinorésistance, avec une diminution significative de la phosphorylation de la tyrosine d’IRS-1 et d’Akt-Ser473 en réponse à la stimulation par l’insuline. Parallèlement, les adipocytes provenant des DT2 présentaient une augmentation d’IL-6 et de l’activité NF-κB. L’introduction de molécules-leurre de NF-κB a inhibé significativement à la fois la sécrétion d’IL-6 et l’activité NF-κB, et a amélioré la phosphorylation de la tyrosine d’IRS-1 et d’Akt-Ser473 en réponse à la stimulation par l’insuline dans les adipocytes provenant de patients atteints de DT2.