In vitro culture conditions affecting minimal inhibitory concentration of bedaquiline against M. tuberculosis

ObjectivesIn developing a standardized drug susceptibility test for bedaquiline, it is very important to know which parameters might impact its activity in vitro and result in false resistance of the bacterium to bedaquiline. We aimed to assess the impact of different in vitro conditions on the minimal inhibitory concentration (MIC) of bedaquiline against Mycobacterium tuberculosis H37Rv reference strain.MethodsThe MIC of M. tuberculosis H37Rv strain was determined under different conditions such as inoculum size, pH, temperatures, log and stationary phase cultures, protein concentration, Tween 80 concentration, and labware plastics.ResultsIncreases in bedaquiline MIC were observed with variations in inoculum size for M. tuberculosis H37Rv on agar or in broth, in protein concentration and labware plastics on agar, and with variations in pH and Tween 80 concentrations in broth.ConclusionsIn order to obtain reproducible MIC results, bedaquiline MIC should be assessed using polystyrene plates or tubes, at pH 7, with a Tween 80 concentration of 0.02%, without protein enrichment and with an inoculum size up to 107 colony-forming unit (CFU)/mL on 7H11 agar or with 105 CFU/mL in 7H9 broth.

RésuméObjectifsDans le cadre du développement d’une méthode de sensibilité pour la bédaquiline, il est important de connaître les facteurs pouvant influencer son activité in vitro et qui pourraient aboutir à une fausse résistance de la mycobactérie à la bédaquiline (BDQ). L’influence de différents facteurs sur la concentration minimale inhibitrice (CMI) de la bédaquiline sur Mycobacterium tuberculosis a été évaluée in vitro.MéthodesLa CMI de la BDQ sur M. tuberculosis a été mesurée en présence de certains facteurs comme la taille de l’inoculum, le pH, la température, les phases de croissance de la culture mycobactérienne, la concentration en protéines, la concentration en Tween 80 et le type de plastique utilisé comme contenant du milieu de culture.RésultatsDes augmentations de la CMI de la BDQ ont été observées en présence de différentes tailles de l’inoculum en bouillon ou en gélose, en présence de différentes concentrations de protéines, en fonction du type de plastique constituant les boîtes de pétri ou des tubes contenant le milieu de culture et en présence de différentes valeurs de pH et de Tween 80 en bouillon.ConclusionsAfin d’obtenir des CMI reproductibles, la CMI de la BDQ devrait être testée dans des tubes ou boîtes de pétri en polystyrène, à pH 7, avec une concentration de Tween 80 de 0,02 %, sans addition de protéines et avec un inoculum allant jusqu’à 107 UFC/mL en gélose 7H11 ou avec 105 UFC/mL en bouillon 7H9.