First report of CTX-M-9 in a clinical isolate of Enterobacter cloacae in a Tunisian hospital

β-lactamases are one of several mechanisms of bacterial resistance to β-lactam antibiotics. The aim of this study was to analyze the resistance to extended-spectrum cephalosporins of a multidrug-resistant isolate of Enterobacter cloacae, BF5011. This strain was isolated from a stool culture, during the nosocomials infections occurring in the intensive care unit of the Military Hospital of Tunis in 2005. Analysis of E. cloacae BF5011 by double-disk synergy test yielded a positive result suggesting the production of extended-spectrum-β-lactamases. Cell sonicate of this isolate is very active against cefotaxime and showed a specific activity (AS) of 7,54 U/mg for the same antibiotic. This activity was inhibited by the sulbactam and the clavulanic acid. By polymerase chain reaction and sequencing, the isolate was found to produce extended-spectrum-β-lactamase, CTX-M-9. The blaCTX-M-9 gene was transferred from E. cloacae by conjugation. Isoelectric focusing method revealed one band with a pI of about 8. This is the first report of CTX-M-9 in Tunisia.

RésuméLa résistance aux antibiotiques chez les bactéries Gram négatives implique plusieurs mécanismes de résistance dont la production de β-lactamases. Le but de ce travail est d’analyser la résistance aux céphalosporines à spectre étendu d’une souche clinique d’Enterobacter cloacae, BF5011. Cette souche a été isolée à partir d’un prélèvement rectal, lors des infections nosocomiales survenant au service de réanimation à l’hôpital militaire de Tunis en 2005. La contribution des mécanismes enzymatiques dans cette résistance est démontrée par le test de synergie. L’extrait protéique de cet isolat est très actif contre la cefotaxime et montre une activité spécifique (AS) de 7,54 U/mg. Cette activité est inhibée par l’acide clavulanique et le sulbactam. Le séquençage des produits PCR ont montré que la souche est productrice d’une CTX-M-9. Le gène blaCTX-M-9, ainsi que ceux de la résistance aux autres antibiotiques sont portés par un plasmide autotransférable de plus de 50 kb. La focalisation isoélectrique des préparations protéiques de la souche E. cloacae BF1150 ainsi que ses transconjugants montre une seule bande de pI estimé à 8.