Dihydropteroate synthase gene mutations in Pneumocystis jiroveci strains isolated from immunocompromised patients

The emergence of Pneumocystis jiroveci drug resistance has been suggested recently by the mutations in the gene encoding dihydropteroate synthase (DHPS). The aim of the present study was to determine the prevalence of DHPS mutations in P. jiroveci strains isolates from bronchoalveolar lavages (BAL) and sputum samples of 21 immunocompromised patients. We used the touchdown-PCR for amplification of DHPS gene and the restriction fragment length polymorphism (RFLP) technique for discrimination of wild and mutant DHPS genotypes. The DHPS amplification was positive in 17 patients (81%). The association of wild genotype and mutant genotype was detected in two patients after the enzymatic digestion of the PCR products by AccI and HaeIII. No mutations in the DHPS gene were seen in 15 patients. In addition, no variation was observed in DHPS genotypes detected in the repeated specimens (BAL and sputum) from some patients. The touchdown PCR-RFLP technique is a simple and rapid method for revelation of DHPS gene mutations in P. jiroveci strains. It could be advantageously used in clinical laboratory to control the prevalence of mutations associated with sulfa resistance.

RésuméL’émergence de souches résistantes de Pneumocystis jiroveci a été récemment expliquée par la présence de mutations au niveau du gène codant pour la dihydroptéroate synthèse (DHPS). L’objectif de cette étude était de déterminer la prévalence de ces mutations dans les souches de P. jiroveci isolées à partir des lavages broncho-alvéolaires (LBA) et des crachats de 21 patients immunodéprimés. Nous avons utilisé la technique de touchdown-PCR pour l’amplification du gène de la DHPS et la technique restriction fragment length polymorphism (RFLP) pour la discrimination entre les génotypes sauvages et mutants. L’amplification du gène codant pour la DHPS était positive pour 17 patients (81 %). L’association du génotype sauvage et mutant a été mise en évidence chez deux patients après la digestion enzymatique du produit de PCR par AccI et HaeIII. Chez les 15 autres patients, aucune mutation n’a été observée. Par ailleurs, aucune variation de génotype n’a été observée dans les différents échantillons (LBA et carachats) isolés à partir d’un même patient. La technique de touchdown PCR-RFLP est une méthode simple et rapide pour la révélation de mutations génétiques au niveau du gène codant pour la DHPS de P. jiroveci. Elle pourrait être avantageusement utilisée dans les laboratoires cliniques pour contrôler la prévalence des mutations associées à la résistance aux sulfamides.