Nouveau test ultrarapide pour la détection de bactéries

RésuméIntroductionLes contrôles bactériologiques sont destinés à réduire les risques de transmission d’infections. Toutefois, les cultures nécessitent de 18 heures à 14 jours et peuvent être faussement négatifs pour des bactéries à croissance lente ou déficientes. L’objectif de ce travail a été de valider un outil pour améliorer les performances des tests bactériologiques.MéthodesCe test est basé sur la réaction de polymérisation en chaîne rapide ou fast real-time PCR (frt PCR). Les ADN extraits des échantillons contenant un contrôle interne sont introduits dans quatre tubes contenant les amorces et sondes. Le programme du thermocycleur est fixé à 1 × à 95 °C, dix minutes et 45 × (15 secondes à 95 °C, huit secondes à 52 °C) et dix secondes à 72 °C.RésultatsLa frt PCR détecte 0,01 UFC/μl (équivalent d’unité formatrice de colonies) de toutes les bactéries et identifie huit genres sans interférences potentielles de l’ADN bactérien de l’environnement ni des champignons et sans procédures additionnelles.DiscussionLa frt PCR détecte toutes les bactéries et quantifie la charge des staphylocoques, streptocoques, corynebactéries, Entérobactéries, Haemophilus, Acinetobacter, Pseudomonas et Propionibacteriaceae.ConclusionLes cultures ne peuvent être obtenus qu’après 24 heures ou plus d’incubation alors que frt PCR réduit ce temps à 90 minutes. Des séries plus importantes doivent être testées pour confirmer l’utilité de ce nouveau test.

IntroductionBacteriological testing is aimed to reduce the risk of transmission of infections. However, the detection of Bacteria by culture requires from 18 hours to 14 days and may produce erroneous results for fastidious species. The goal of this work was to design and validate a new tool for bacterial testing.MethodsThe test is based on the fast real-time PCR (frt PCR). The DNA extracted from samples containing internal controls are introduced into four tubes containing primers and probes for the frt PCR. The cycling program consists in 1 × at 95 °C for 10 min and 45 × (15 s at 95 °C, 8 s) at 52 °C and 10 s at 72 °C.ResultsThe frt PCR detects 0,01 CFU/μl of Bacteria and identifies eight Genera without interferences from the environment or from fungi and with no need for melting curve analysis or additional sequencing.DiscussionThe frt PCR detects and quantifies Bacteria identifying and assessing the load of Staphylococci, Streptococci, Haemophilus, Pseudomonas, Enterobacteria, Acinetobacter, Propionibacteriacae and Corynebacteria.ConclusionCultures require at least 24 hours but the new frt PCR reduces the time to 90 minutes. Larger series of samples are necessary to confirm the usefulness of this new test for routine bacterial sterility controls.