Co-infection par le VHB de génotype G : développement, validation et application d’une technique de quantification spécifique du VHB de génotype G

RésuméBut de l’étudeUne méthode de détection et de quantification du génotype G du virus de l’hépatite B (VHB-G) a été développée puis appliquée pour étudier l’épidémiologie et l’évolution de la co-infection par le VHB-G au cours de traitements antiviraux.Patients et méthodesUne PCR multiplex en temps réel a été développée puis validée sur des mélanges plasmidiques de VHB-A et VHB-G. La recherche de VHB-G a été effectuée sur des prélèvements de patients chroniquement infectés par le VHB suivis à la Pitié-Salpêtrière.RésultatsDeux amorces, situées de part et d’autres de l’insertion de 36 nucléotides du VHB-G et deux sondes, dont une spécifique de l’insert, ont été validées pour une PCR en temps réel multiplex. Cet outil présente une bonne corrélation avec les systèmes commerciaux de quantification sur une plage de 2 à 7 Log UI/mL. Une quantification du VHB-G avec une précision de 5 à 10 % a été obtenue sur des mélanges de clones VHB-G et A. Chez les patients infectés par le VIH, une prévalence de 25 % (31/125) d’infection par le VHB-G a été trouvée alors qu’elle est inférieure à 1 % dans la population mono-infectée par le VHB. Le suivi de la charge VHB-G chez cinq patients démontre que le VHB-G n’émerge pas sous traitement antiviral.ConclusionUne méthode de quantification spécifique du VHB-G au sein d’un mélange de différents génotypes a été mise au point. La prévalence importante du VHB-G chez les patients VIH est inattendue. Nos données n’indiquent pas une résistance intrinsèque du VHB-G aux traitements antiviraux.

Goal of the studyA detection and quantification method specific of genotype G hepatitis B virus (G-HBV) was developed and used to study the epidemiology and evolution of G-HBV co-infection during antiviral therapy.Patients and methodsA multiplex real time PCR was developed and validated on A-HBV and G-HBV plasmid mixes. G-HBV infection was sought for on chronic hepatitis B carriers followed in our institution.ResultsTwo primers, flanking the specific G-HBV 36 nucleotide insertion and two probes, including one specific for the insertion, were validated for a multiplex real time PCR. This new tool was well correlated to commercially available quantification systems within a 2 to 7 log10 IU/mL range. On A- and G-HBV clonal mixes, G-HBV was quantified with a precision between 5 to 10%. On HBV-HIV infected patients, a 25% G-HBV prevalence was found, while it was below 1% in HBV mono-infected patients. Longitudinal G-HBV quantifications on five treated patients indicate that G-HBV is not selected by antiviral treatment.ConclusionA specific method for G-HBV quantification within multi-genotype mixes was set up. The important G-HBV prevalence in HIV patients was unexpected. Our data are not in favour of an intrinsic resistance of G-HBV to current antivirals.