La mise au point d’un milieu sensible, spécifique et prédictif de recherche de Stenotrophomonas maltophilia dans l’environnement des soins

RésuméObjectifsMettre au point Stenotrophomonas maltophilia selective medium with coloured indicator (SM2i), un milieu sélectif, spécifique, valide pour la recherche de S. maltophilia (Smalto) dans l’environnement de soins.Matériel et méthodeMis au point, de mars 2007 à juin 2008, dans le cadre d’un projet hospitalier de recherche clinique, SM2i est constitué de Mueller Hinton (MH) base, maltose, DL-méthionine, bleu de bromothymol. Le mélange autoclavé, refroidi à 50 °C, pH ajusté à 7,1, est additionné de vancomycine, imipénème, amphotéricine B, entre autres. SM2i a été mis au point, comparativement aux géloses MH plus imipénème et au sang (GS), à l’aide de souches CIP de Smalto, Burkholderia cepacia, Pseudomonas aeruginosa (Psa) plus une souche Smalto du laboratoire d’hygiène. Il a été validé sur des souches multirésistantes de Psa et d’entérocoques résistants à la vancomycine, sur une série de prélèvements d’eau, puis évalué sur des prélèvements d’eau froide et d’écouvillons de robinets par rapport aux géloses MH plus imipénème, MH et GS. Sensibilité, spécificité, valeurs prédictives positive (VPP) et négative (VPN), exactitude et rapport de vraisemblance de SM2i ont été déterminés.RésultatsSur SM2i, meilleur que MH et GS pour la culture des souches-tests de Smalto, les colonies de Smalto sont lisses, rondes, verdâtres, vert olive à vert tilleul, s’entourent d’un halo bleu, ont un centre vert olive et une zone périphérique plus claire ou un centre vert foncé avec une périphérie vert olive. SM2i apparaît sélectif, spécifique, exact, prédictif pour rechercher Smalto dans l’environnement. Dans 122 paires d’échantillons, eau froide de premier jet et écouvillons, les prévalences de Smalto étaient de 14,8 % dans l’eau, 10,7 % sur les écouvillons. Smalto était identifié isolément dans 6,6 % d’eau et 2,5 % d’écouvillons, il avait contaminé 17,2 % des robinets d’eau froide. Comparativement au MH, sensibilité, spécificité, VPP, VPN, exactitude de SM2i étaient respectivement de 100, 100, 100, 100, 100 % et ∞ sur l’eau et 87,5 ; 100 ; 100 ; 98,1 ; 98,4 % et ∞ sur les écouvillons.ConclusionSM2i est sensible, spécifique, prédictif pour rechercher Smalto dans l’environnement. La coloration des colonies évite toute confusion d’avec d’autres bactéries multirésistantes qui pourraient se développer sur SM2i. L’évaluation de ce milieu sur des prélèvements cliniques se poursuit.

BacgroundStenotrophomonas maltophilia (Smalto) is a prominent nosocomial pathogen, commonly isolated in the hospital environment. Multiple Smalto nosocomial outbreaks have been linked to contaminated water sources. This study aimed to develop a medium able to ease healthcare environment Smalto isolation.MethodsFinanced, from March 2007 to June 2008, by a university hospital of Amiens’ clinical research program, this study allowed Stenotrophomonas maltophilia selective medium with coloured indicator (SM2i) development. SM2i is constituted of Mueller Hinton agar (MH), maltose, DL-methionine, bromothymol blue. The mixture sterilized is refreshed at 50 °C, its pH adjusted to 7.1, and render selective by addition of vancomycin, imipenem and amphotericin B. Then, SM2i agar is sunk into 90 cm diameter Petri dish dated and stored at 4 °C for 4 weeks. SM2i is developed using Pasteur Institute culture type collection (CIP) strains of Smalto, Burkholderia cepacia, Pseudomonas aeruginosa (Psa) and a Smalto strain of our hygiene laboratory collection. It was validate on Psa imipenem-resistant and Enterococcus faecium vancomycin-resistant strains, then, tested on cold water first jet and faucet cotton-swabs samples. SM2i tests were made in comparison with the MH agar, MH agar plus four paper disks loaded 10 μg of imipenem and Cetrimed agar. Its sensitivity, specificity, positive (PPV) and negative (NPV) predictive values, accuracy, likehood-ratio (LR) and Youden index have been determined.ResultsSM2i agar is better in culturing Smalto test-strains. On SM2i, Smalto colonies are smooth, round, greeny, olive or lime green, have a green olive centre with a peripheral lighter or a dark green centre with an olive green suburb surrounded by a blue halo. SM2i is a selective, specific, predictive, accurate medium to search for Smalto in healthcare environment. In 122 pairs of cold water first jet and taps cotton-swabs samples, Smalto was isolated from 14.8% of water samples, 10.7% of cotton-swabs samples. It was isolated alone in 6.6% of water samples and 2.5% of swab samples. Thus, smalto has biocontaminated 17.2% of cold water taps. Compared to MH agar, SM2i sensitivity, specificity, PPV, NPV, accuracy, LR were 100, 100, 100, 100, 100% and ∞, and 87.5, 100, 100, 98.1, 98.4% and ∞ for water and cotton-swabs samples respectively.ConclusionSM2i is a selective, specific, predictive medium which can allow easily isolating and identifying accurately Smalto in environmental samples. Its evaluation on clinical samples is on going.