Caractérisation des mécanismes enzymatiques de résistance aux β-lactamines chez des souches de Acinetobacter baumannii isolées à l’hôpital universitaire Sahloul, Sousse en Tunisie (2005)

RésuméBut de l’étudeLa multirésistance bactérienne aux β-lactamines y compris l’imipénème est un phénomène émergent au niveau de l’hôpital universitaire Sahloul en Tunisie. Dans ce cadre, l’objectif de ce travail a été d’élucider les mécanismes de résistance enzymatique naturels ou acquis chez des souches de Acinetobacter baumannii isolées de différents services de l’hôpital.Matériels et méthodesUn échantillon de 26 souches de Acinetobacter baumannii a été étudié. La caractérisation des β-lactamases a été entreprise par l’isoéléctrofocalisation sur gel des extraits enzymatiques, des tests phénotypiques à la recherche de β-lactamases à spectre étendues (BLSE) et de métallo-ß-lactamases (MBL) et, finalement, par des expériences d’amplification génique et de séquençage à la recherche de la céphalosporinase chromosomique AmpC, de la séquence d’insertion ISAbaI et des β-lactamases de classe D correspondant aux oxacillinases à activité carbapénémase. L’étude de la clonalité des souches bactériennes a été réalisée par électrophorèse en champ pulsé de l’ADN génomique macro-digéré par l’enzyme de restriction ApaI.RésultatsL’isoéléctrofocalisation a détecté l’existence de deux β-lactamases de pI supérieure à 8. Aucune souche n’est productrice de BLSE ou de MBL. Toutes les bactéries étudiées présentaient le gène de l’AmpC et de la séquence d’insertion ISAbaI ainsi que de l’oxacillinase naturelle OXA-69. Aucune oxacillinase acquise à activité carbapénémase n’a été détectée. Toutes les souches se sont révélées clonales suite à l’électrophorèse en champ pulsé.ConclusionLa résistance aux β-lactamines et à l’imipénème serait due à l’hyperproduction de la céphalosporinase AmpC ainsi qu’à la production à un niveau basale de l’OXA-69 ; cela étant associé à l’imperméabilité naturelle aux β-lactamines caractéristique des souches de Acinetobacter baumannii. Une forte clonalité a été démontrée entre les souches concernées par cette étude ; l’application rigoureuse des règles d’hygiène et l’usage rationnel des antibiotiques permettraient de limiter la dissémination de tels germes multirésistants.

ObjectiveThe bacterial multiresistance to β-lactams and imipenem is an emergent feature in the university hospital Sahloul in Tunisia. This study was conducted to elucidate natural and acquired mechanism of resistance to β-lactams in strains of Acinetobacter baumannii isolated in different wards of the hospital.Materials and methodsA specimen of 26 clinical strains of Acinetobacter baumannii was studied. β-lactamases characterization was done by isoelectric focusing on gel of crude enzymatic extract, phenotypic tests for detection of extended spectrum β-lactamases (ESBL) and metallo-β-lactamases (MBL) and finally by amplification (PCR) and sequencing of genes encoding naturally occurring AmpC, the insertion sequence ISAbaI and oxacillinase with carbapenemase activity. Study of clonality of strains was performed by analysis of genomic DNA digested by the restriction enzyme ApaI and separated by pulsed field gel electrophoresis (PFGE).ResultsThe isoelectric focusing on gel revealed two bands of β-lactamase activity with a pI upper than 8. None ESBL or MBL was detected. PCR for AmpC, ISAbaI and OXA-69 were positive for all studied strains. The sequencing of PCR products show high identity (99–100%) with genes described previously. PFGE analysis has demonstrated clonality of studied strains.ConclusionResistance to β-lactams including imipenem is associated to the hyper production of the AmpC enzyme and expression of OXA-69. Those enzymatic mechanisms are associated with the natural low permeability to β-lactams which characterize Acinetobacter baumannii strains. High clonal relationship of studied strains proved by PFGE analysis has shown the necessity of implementation of strict hygienic rules and rational antibiotic usage.