Optimisation du diagnostic rétrospectif de l'infection congénitale à cytomégalovirus à partir de la carte de Guthrie

RésuméL'infection congénitale à cytomégalovirus (CMV) affecterait 1 % des nouveau-nés. Parmi les 90 % asymptomatiques à la naissance, 5 à 15 % développeront des séquelles. Or, au-delà des premiers jours de vie, ni la sérologie, ni la virurie ne permettent de différentier une infection congénitale d'une infection péri- ou post-natale. Selon les données de la littérature, le diagnostic rétrospectif de l'infection congénitale à CMV serait envisageable à partir de la carte de Guthrie, unique prélèvement réalisé systématiquement au troisième jour de vie. Notre travail avait pour but de choisir et d'optimiser une méthode d'extraction de l'ADN viral à partir du sang séché, et d'étudier la pérennité de cette détection jusqu'à un an après la réalisation des cartes. Cette évaluation a été réalisée sur dix cartes témoins (dix sangs de cordon d'enfants nés de mères séronégatives pour le CMV au moment de la naissance, infectés expérimentalement par des dilutions croissantes de CMV). Cette étude a montré la sensibilité supérieure de l'extraction au phénol–chloroforme après traitement par la protéinase K, par rapport à celle par la chaleur ou par un kit commercialisé. Après six mois et un an, nous n'avons pas observé de perte de sensibilité de la détection. Une recherche rétrospective du CMV sur la carte de Guthrie pourrait dorénavant faciliter le diagnostic virologique tardif de séquelles d'une infection congénitale. Nous validons actuellement ce travail sur les cartes de Guthrie d'enfants dont l'infection congénitale à CMV est documentée.

Out of the 90% of cytomegalovirus (CMV) congenitally infected children that are asymptomatic at birth, 5 to 15% will later develop complications, mainly neurodevelopmental defects and/or deafness. Unfortunately, after the first 2 weeks of life, usual diagnostic techniques for CMV detection (viral culture and serology) are useless to differentiate congenital infection from post-natal acquired infection, whereas detection of viral DNA from dried blood spots (DBS; Guthrie cards), systematically collected from all newborns in the first days of life, has been described for late diagnosis of CMV congenital infection. The aim of our study was to choose and optimise a viral DNA extraction method from DBS and to study if CMV DNA detection is reliable when DBS are stored for 1 year at room temperature or 2 months at 37 °C. 10 reference cards (blood collected from CMV seronegative newborns (IgG/IgM negative) were “infected” with serial dilutions of virus and spotted on Guthrie cards) were tested. 3 extraction methods were evaluated, products of PCR were analyzes by agarose gel electrophoresis and quantification of CMV from DBS was also performed. Analysis of the results obtained from reference cards showed higher sensitivity of phenol/chloroform extraction following treatment with proteinase K, compared to heat extraction in cell culture medium or extraction with a commercial kit. We did not observe quantitative loss of viral DNA after 1 year storage at room temperature. CMV DNA detection from Guthrie cards could become a very useful tool for retrospective diagnosis of congenital CMV infection when sequelae are diagnosed in the first years of life. We are pursuing this study with DBS from congenitally infected children.