کد مقاله | کد نشریه | سال انتشار | مقاله انگلیسی | نسخه تمام متن |
---|---|---|---|---|
7557713 | 1491352 | 2016 | 8 صفحه PDF | دانلود رایگان |
عنوان انگلیسی مقاله ISI
Development of a sample preparation method for monitoring correct disulfide linkages of monoclonal antibodies by liquid chromatography-mass spectrometry
ترجمه فارسی عنوان
توسعه روش آماده سازی نمونه برای نظارت بر پیوند های دیسفالید صحیح از آنتی بادی های مونوکلونال با استفاده از اسپکترومتری کروماتوگرافی مایع
دانلود مقاله + سفارش ترجمه
دانلود مقاله ISI انگلیسی
رایگان برای ایرانیان
کلمات کلیدی
mAbIgGRSDN-ethylmaleimideACNTFADTTLC–MS - LC-MSMonoclonal antibody - آنتی بادی مونوکلونالAcetonitrile - استونیتریلTrifluoroacetic acid - اسید Trifluoroaceticrelative standard deviation - انحراف استاندارد نسبیimmunoglobulin G - ایمونوگلوبولین GCho - برایChinese Hamster Ovary - تخمدان هامستر چینیdithiothreitol - دیتیوتریتولlight chain - زنجیره سبکheavy chain - زنجیره سنگینliquid chromatography–mass spectrometry - طیف سنجی جرم کروماتوگرافی مایعMass spectrometry - طیف سنجی جرمیIAM - من هستمEIC - مهندسانPeptide mapping - نقشه برداری پپتیدهNEM - نهDisulfide linkage - پیوند دی سولفیدextracted ion chromatogram - کروماتوگرافی یون استخراج شدهiodoacetamide - یووداکتامید
موضوعات مرتبط
مهندسی و علوم پایه
شیمی
شیمی آنالیزی یا شیمی تجزیه
چکیده انگلیسی
The number and positions of disulfide linkages in a therapeutic monoclonal antibody (mAb) play a crucial role in forming and stabilizing a correct mAb structure that is critical to its function. Peptide mapping by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) analysis of enzymatically digested mAb under nonreducing condition is a powerful method for disulfide linkage characterization to ensure mAb drug function and quality. However, the development of a robust sample preparation method with improved digestion efficiency and minimized disulfide scrambling for disulfide linkage analysis is essential but challenging. In this study, a sample preparation method for analysis of correct disulfide linkages in therapeutic mAbs was developed. Instead of common trypsin digestion, Lys-C plus trypsin was used in this approach to improve digestion efficiency. In addition, lower digestion temperature (25 °C) and lower digestion pH (pH 6.8) were also examined to minimize disulfide scrambling. Our results showed that Lys-C plus trypsin digestion at pH 6.8 and 25 °C is a better sample preparation condition for all therapeutic mAbs tested in this study because of a better digestion efficiency (all expected disulfide linkages can be confidently observed) and minimal disulfide scrambling.
ناشر
Database: Elsevier - ScienceDirect (ساینس دایرکت)
Journal: Analytical Biochemistry - Volume 495, 15 February 2016, Pages 21-28
Journal: Analytical Biochemistry - Volume 495, 15 February 2016, Pages 21-28
نویسندگان
Yi Wang, Huijuan Li, Mohammed Shameem, Wei Xu,