Désérythrocytation de moelle osseuse par gradient de densité sur COBE 2991 avec le kit triple « bérets »

RésuméLa greffe de moelle osseuse allogénique ABO-incompatible nécessite l’élimination des globules rouges du greffon. De nombreux services d’ingénierie cellulaire ont adopté la technique de centrifugation sur gradient de densité (Ficoll) sur COBE 2991 à l’aide de kit simple « béret ». Cependant, les tubulures de ce kit ne sont pas adaptées aux pompes péristaltiques disponibles actuellement. De plus, deux autres kits sont nécessaires : un pour la concentration de la moelle avant le Ficoll et un pour le lavage après Ficoll. Nous avons mis au point un protocole utilisant le kit COBE triple « bérets » pour réaliser l’ensemble de la manipulation (concentration, Ficoll et lavages). Ce kit a l’avantage d’inclure une tubulure en PVC qui s’adapte parfaitement aux pompes péristaltiques usuelles et de permettre la réalisation du procédé sans être obligé de faire des connexions entre plusieurs kit, diminuant ainsi les risques de contamination. Après avoir défini la séquence de manipulation avec des buffy-coat de sang total, nous avons réalisé des « désérythrocytations » de moelles osseuses de donneur sain. La déplétion en globules rouges a été de 97,9 ± 1,1 % et la récupération en cellules CD34+ a été de 89,6 ± 8,7 %. Ces résultats sont comparables à ceux que nous avions obtenus avec le kit simple « béret » (déplétion en GR = 94,0 ± 6,8 % et récupération de cellules CD34+ = 95,9 ± 20,3 %). Nous concluons que ce kit, très peu employé en France, est pratique et offre une sécurité supérieure au kit simple « béret ».

ABO-incompatible bone marrow transplantation requires red blood cell depletion. Lots of laboratory adopted the technique of density gradient centrifugation (Ficoll-hypaque) using the COBE 2991 cell processor with simple-bag processing set. However, tubing of this set is not adapted to the currently available peristaltic pumps. Moreover, two other sets are required: one for the buffy-coat and one for postgradient cell washing. We developed a method using triple-bag processing set to conduct whole-step procedure (concentration, Ficoll and washing). Peristaltic PVC tubing is provided in one line of the set allowing a safe processing without several connections thus reducing risks of microbial contamination. First, we used buffy-coat of total blood for training, then, we carried out red cell depletion of healthy bone marrow donors. The red blood cell depletion was 97.9 ± 1.1% and CD34+ recovery was 89.6 ± 8.7%. These results are very close to those obtained with the simple-bag set (red cell depletion. = 94.0 ± 6.8% and CD34+ recovery = 95.9 ± 20.3%). We conclude that the triple-bag system, very little used in France, is practical, simplified the manipulation and is more safety than the simple-bag set.