Evaluación del método de difusión en agar Neo-Sensitabs® para la determinación de la sensibilidad a los antifúngicos de Cryptococcus gattii, utilizando tres medios de cultivo diferentes

ResumenEl método de difusión en agar Neo-Sensitabs® fue evaluado en la determinación de la sensibilidad a la anfotericinaB (AMB), fluconazol (FLC), itraconazol (ITC) y voriconazol (VRC) de 30 cepas de Cryptococcus gattii. Se utilizaron tres medios de cultivo diferentes: Müeller-Hinton (MH), RPMI 1640 (RPMI) y Antibiotic medium 3 (AM3), todos ellos suplementados con 2% de glucosa y 0,5 μg/ml de azul de metileno. Los ensayos se realizaron tres veces en días diferentes y en tres tiempos de incubación (48, 72 y 96 h). Los resultados fueron comparados con aquellos obtenidos mediante el método de referencia de microdilución CLSI M27-A2. El grado de reproducibilidad del método de difusión fue del 100% para el VRC y el ITC, del 98,3-100% para la AMB y del 43,3-73,3% para el FLC. La major reproducibilidad se obtuvo a las 48 h de incubación y no se observaron importantes diferencias entre los distintos medios de cultivo ensayados. La mejor concordancia entre el método Neo-Sensitabs® y el de referencia se observó con el VRC y la peor con el ITC (100% y 56,7%, respectivamente), en todas las condiciones estudiadas. La concordancia entre los dos métodos con la AMB fue alta (93,3%-96,7%); sin embargo, el método Neo-Sensitabs® no detectó los aislamientos resistentes (discrepancia clasificada como “very major error”) en todos los tiempos de incubación ensayados. Solamente la concordancia entre dichos métodos con el FLC fue dependiente del tiempo de incubación y medio utilizado; los mejores resultados se obtuvieron a las 48 h de incubación, y con los medios MH y RPMI (80%, en ambos medios).

SummaryThe Neo-Sensitabs® diffusion method was evaluated for determining the antifungal susceptibilities of 30 Cryptococcus gattii isolates to amphotericin B (AMB), fluconazole (FLC), itraconazole (ITC) and voriconazole (VRC). Three different culture media, Müeller-Hinton (MH), RPMI 1640 (RPMI) and Antibiotic medium 3 (AM3), all supplemented with 2% of glucose and 0.5 μg/ml of methylene blue, were tested. The tests were repeated three times on different days at three incubation times (48, 72 and 96 h). Results were compared with those obtained with the CLSI M27-A2 broth microdilution method. The degree of reproducibility of the diffusion test was 100% for VRC and ITC, 98.3-100% for AMB and 43.3-73.3% for FLC. The best reproducibility was observed at 48 h of incubation and no important differences among media were observed at any of the incubation times assayed. Between Neo-Sensitabs® and the reference method, VRC showed the best agreement and ITC the worst in all conditions tested (100% and 56.7%, respectively). AMB showed a high agreement between the two methods (93.3% to 96.7%) but Neo-Sensitabs® assay failed to detect resistant isolates (discrepancy classified as “very major error”) in all times of incubation assayed. Only agreement between both methods for FLC was clearly affected by incubation time and media used, the best results being achieved at 48 h of incubation when MH and RPMI (80.0%, in both media) were used.