Apport de la PCR dans la recherche et l’identification des microsporidies intestinales chez les sujets infectés par le VIH

RésuméButLes microsporidioses intestinales comptent parmi les infections opportunistes redoutables chez les sujets immunodéprimés. L’objectif de ce travail est d’évaluer l’apport de la PCR dans la recherche et l’identification des microsporidies dans les selles de patients infectés par le VIH.Patients et méthodesLes selles de 119 patients tunisiens infectés par le VIH ont été traitées à la recherche de microsporidies par la coloration au trichrome et par une PCR utilisant les amorces universelles V1/PMP2 ciblant un fragment du gène de la petite sous-unité ribosomale SSU-rRNA des microsporidies. Les amplifias obtenus en PCR ont été purifiés et séquencés par le séquenceur ABI PRISM 377 DNA.RésultatsLes résultats confirment les meilleures performances de la PCR dans la détection des microsporidies intestinales en révélant un taux d’infection de 14,3 % significativement supérieur à celui de 6,7 % révélé par la microscopie (p = 0,03). Comme déjà rapporté, l’infection était associée au taux de lymphocytes T CD4 des patients ; 23,9 % de prévalence en dessous de 200/mm3 versus 5,6 % au-dessus (p = 0,008). Le séquençage des amplifias de 15 des 17 patients positifs en PCR a confirmé dans tous les cas les identifications présomptives basées sur la taille des bandes obtenues, 250 pb pour Enterocytozoon bieneusi (sept cas) et autour de 270 pb pour Encephalitozoon intestinalis (neuf cas) ; un patient ayant présenté une infection mixte.ConclusionLa PCR, grâce à une meilleure sensibilité, est en train de détrôner la classique coloration au trichrome dans le diagnostic des microsporidioses intestinales. Par sa capacité à identifier les espèces en cause, la PCR est également utile dans la prise en charge des cas par l’orientation des prescriptions médicales chez les sujets parasités.

AimIntestinal microsporidiosis are among the most frequent opportunistic diseases in immunocompromised subjects. This study aimed to evaluate the contribution of PCR for a better detection and species identification of microsporidia in stool specimens of HIV-infected patients.Patients and methodsStool samples obtained from 119 HIV-infected Tunisian subjects were screened for intestinal microsporidiosis by light microscopy using Weber's modified Trichrome stain and by a PCR method using universal primers V1/PMP2 which amplified a common fragment of the small subunit rRNA gene of microsporidia. The obtained PCR products were then sequenced using an ABI PRISM 377 DNA sequencer.ResultsThe results showed a better sensitivity of PCR in the detection of microsporidia with an infection rate of 14.3% significantly higher than that of 6.7% obtained by light microscopy (p = 0.03). As previously described, intestinal microsporidiosis was associated with low CD4 cell counts; 23.9% infection rate in patients having CD4 cell count under 200/mm3 against 5.6% in patients with higher CD4 cell count (p = 0.008). The sequencing of 15 out of the 17 positive PCR products has confirmed in all cases the species identified based on the PCR fragment size i.e., 250 pb for Enterocytozoon bieneusi (seven cases) and about 270 pb for Encephalitozoon intestinalis (nine cases); one case revealed a double infection.ConclusionPCR proved to be more effective than classical Trichrome stain for the diagnosis of intestinal microsporidiosis. Moreover, the ability of PCR to identify the species involved could also be useful for cases management.