A first pilot study on the neonatal screening of primary immunodeficiencies in Spain: TRECS and KRECS identify severe T- and B-cell lymphopaenia

IntroductionEarly diagnosis of primary immunodeficiency such as severe combined immunodeficiency (SCID) and X-linked agammaglobulinemia (XLA) improves outcome of affected infants/children. The measurement of T-cell receptor excision circles (TRECS) and kappa-deleting recombination excision circles (KRECS) can identify neonates with severe T or B-cell lymphopaenia.ObjectivesTo determine TRECS and KRECS levels from prospectively collected dried blood spot samples (DBS) and to correctly identify severe T and B-cell lymphopaenia.Material and methodsDetermination of TRECS and KRECS by multiplex PCR from neonates born in two tertiary hospitals in Seville between February 2014 and May 2014. PCR cut-off levels: TRECS < 15 copies/μl, KRECS < 10 copies/μl, ACTB (β-actin) > 1000 copies/μl. Internal (XLA, ataxia telangiectasia) and external (SCID) controls were included.ResultsA total of 1068 out of 1088 neonates (mean GA 39 weeks (38–40) and BW 3238 g (2930–3520) were enrolled in the study. Mean (median, min/max) copies/μl, were as follows: TRECS 145 (132, 8/503), KRECS 82 (71, 7/381), and ACTB 2838 (2763, 284/7710). Twenty samples (1.87%) were insufficient. Resampling was needed in one neonate (0.09%), subsequently giving a normal result. When using lower cut-offs (TRECS < 8 and KRECS < 4 copies/μl), all the samples tested were normal and the internal and external controls were correctly identified.ConclusionThis is the first prospective pilot study in Spain using TRECS/KRECS/ACTB-assay, describing the experience and applicability of this method to identify severe lymphopaenias. The ideal cut-off remains to be established in our population. Quality of sampling, storage and preparation need to be further improved.

ResumenIntroducciónEl diagnóstico precoz de inmunodeficiencias primarias, como la inmunodeficiencia combinada grave (IDCG) y la agammaglobulinemia ligada al cromosoma X (ALX), mejora el pronóstico de los niños afectados. La medida de los T-cell receptor excision circles (TRECS) y kappa-deleting recombination excision circles (KRECS) puede identificar neonatos con linfopenias T y/o B graves.ObjetivoCuantificar los niveles de TRECS y de KRECS de manera prospectiva a partir de muestras de sangre seca de talón para identificar de manera correcta linfopenias T y/o B.Materiales y métodosDeterminación de TRECS y de KRECS mediante reacción en cadena de polimerasa multiplex en neonatos nacidos entre febrero y mayo del 2014. Los puntos de corte empleados fueron: TRECS < 15 copias/μl, KRECS < 10 copias/μl, ACTB (β-actina) > 1.000 copias/μl. Se incluyeron controles internos (ALX, ataxia) y externos (IDCG).ResultadosFueron analizadas 1.068 muestras de las 1.088 recogidas (edad gestacional media: 39 semanas [38-40]; peso al nacer medio 3.238 g [2.930-3.520]). La media (mediana, min/máx) copias/μl obtenidas fueron las siguientes; TRECS 145 (132, 8/503), KRECS 82 (71, 7/381) y ACTB 2838 (2763, 284/7710). Veinte muestras (1,87%) fueron insuficientes para el análisis. El re-test fue necesario en un neonato (0,09%), confirmándose resultados normales posteriormente. Empleando puntos de corte inferiores (TREC < 8 y KREC < 4 copias/μl), todas las muestras resultaron normales y se identificaron los controles internos y externos correctamente.ConclusiónEs el primer estudio prospectivo realizado en España usando el ensayo TREC/KREC/ACTB para identificar linfopenias graves. Es necesario establecer puntos de corte adecuados para nuestra población, mejorar la toma de muestras, su almacenamiento y la preparación de las mismas.