کد مقاله | کد نشریه | سال انتشار | مقاله انگلیسی | نسخه تمام متن |
---|---|---|---|---|
1984455 | 1539975 | 2007 | 12 صفحه PDF | دانلود رایگان |
عنوان انگلیسی مقاله ISI
Characterisation of a bis(5â²-nucleosyl)-tetraphosphatase (asymmetrical) from Drosophila melanogaster
دانلود مقاله + سفارش ترجمه
دانلود مقاله ISI انگلیسی
رایگان برای ایرانیان
کلمات کلیدی
Ap4A hydrolaseeGFPEGTADAPIP4aAPFNUDIXDIPP4′,6-diamidino-2-phenylindole - 4 '، 6-دیامیدینو-2-فنیلینولadenosine 5′-tetraphosphate - آدنوزین 5'-تتراسفاتEST - استReverse transcriptase - ترانس کریپتاز معکوس یا وارونویسExpressed Sequence Tag - تکرار اظهار نظرFluoride - فلوراید Drosophila melanogaster - مگس سرکه، مگس میوهpolymerase chain reaction - واکنش زنجیره ای پلیمرازPCR - واکنش زنجیرهٔ پلیمرازenhanced green fluorescent protein - پروتئین فلورسنت سبز افزایش یافته استdiadenosine polyphosphate - پلی فسفات دیادنوزین
موضوعات مرتبط
علوم زیستی و بیوفناوری
بیوشیمی، ژنتیک و زیست شناسی مولکولی
زیست شیمی
پیش نمایش صفحه اول مقاله

چکیده انگلیسی
The intracellular functions of diadenosine polyphosphates are still poorly defined. To understand these better, we have expressed and characterized a heat stable, 16.6 kDa Nudix hydrolase (Apf) that specifically metabolizes these nucleotides from a Drosophila melanogaster cDNA. Apf always produces an NTP product, with substrate preference depending on pH and divalent ion (Zn2+ or Mg2+). For example, diadenosine tetraphosphate is hydrolysed to ATP and AMP with Km, kcat and kcat/Km values 9 μM, 43 sâ1 and 4.8 μMâ1 sâ1 (pH 6.5, 0.1 mM Zn2+) and 12 μM, 13 sâ1 and 1.1 μMâ1 sâ1 (pH 7.5, 20 mM Mg2+), respectively. However, diadenosine hexaphosphate is efficiently hydrolysed to ATP only at pH 7.5 with 20 mM Mg2+ (Km, kcat and kcat/Km values of 15 μM 4.0 sâ1, and 0.27 μMâ1 sâ1). Fluoride potently inhibits diadenosine tetraphosphate hydrolysis in the presence of Mg2+ (IC50 = 20 μM), whereas it is ineffective in the presence of Zn2+, supporting the view that inhibition involves a specific, MgF3â-containing transition state analogue complex. Patterns of Apf expression in Drosophila tissues show Apf mRNA levels to be highest in embryos and adult females. Subcellular localization with Apf-EGFP fusion constructs reveals Apf to be predominantly nuclear, having an apparent preferential association with euchromatin and facultative heterochromatin. This supports a nuclear function for diadenosine tetraphosphate. Our results show Apf to be a fairly typical member of the bis (5â²-nucleosyl)-tetraphosphatase subfamily of Nudix hydrolases with features that distinguish it from a previously reported bis (5â²-nucleosyl)-tetraphosphatase hydrolase activity from Drosophila embryos.
ناشر
Database: Elsevier - ScienceDirect (ساینس دایرکت)
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology - Volume 39, Issue 5, 2007, Pages 943-954
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology - Volume 39, Issue 5, 2007, Pages 943-954
نویسندگان
Lucinda Winward, William G.F. Whitfield, Timothy J. Woodman, Alexander G. McLennan, Stephen T. Safrany,