Modèles de cultures cellulaires kératinocytaires de prépuce. Possibilité d’application chez les enfants brûlés

RésuméBut de l’étudeNous avons testé la capacité de division et de différenciation cellulaire in vitro des kératinocytes issus de prépuce.Matériels et méthodesPendant une période de 12 mois et après l’autorisation des parents, nous avons récupéré 18 pièces opératoires préputiales. L’âge moyen des enfants opérés était de quatre ans. Les kératinocytes ont été isolés après traitement de la peau par la thermolysine et la trypsine. Après les procédures de filtration, de centrifugation et de numérotation, nous avons mis les kératinocytes en culture monocouche. Parallèlement, des treillis de collagène contenant des fibroblastes humains ont été réalisées. Les kératinocytes ont été ensemencés à la surface des treillis. Après neuf jours de culture, les « tissus » ont été fixés pour analyses histologiques et immunohistologiques qui permettaient de mettre en évidence les marqueurs caractéristiques de la différenciation épidermique.RésultatsNous avons obtenu une moyenne de 8,8/106 de cellules par pièce opératoire. Après sept jours de culture, nous avons obtenu en moyenne 23,7/106 de cellules par culture. Au contact des treillis de collagène, nous avons obtenu une culture cellulaire pluristratifiée et nous avons mis en évidence les marqueurs de la différenciation kératinocytaire (la filaggrine, la loricrine et la transglutaminase) ainsi que les marqueurs de la jonction dermoépidermique (collagène VII et laminine V).ConclusionLes kératinocytes issus de prépuce possèdent une grande capacité de division. Ces cellules peuvent se diviser longtemps avant d’entrer en différenciation. Les constatations obtenues lors de ce travail, nous permettent de proposer à nos patients de réaliser le prélèvement préputial pour utiliser les kératinocytes dans la couverture d’une perte de substance épidermique, particulièrement chez les enfants brûlés.

SummaryPurpose of the studyWe tested in vitro the keratinocytes capacity for division and differentiation. The donor site was the human foreskin.Patients and methodsFor 12 months, we harvested 18 foreskins after circumcision. The middle age of the operated children was four years. The keratinocytes were isolated after double enzymatic digestion (thermolysin and trypsin, respectively). After filtration and centrifugation we put the keratinocytes in culture. In parallel, the keratinocytes were cultivated on the surface of collagen lattices. The keratinocytes were cultured in submerged condition for two days and then in an air-liquid interface condition for further differentiation. After nine days of culture, a histological examination and immunostain were used. An immunohistologic analysis made it possible to highlight the markers characteristic of epidermal skin differentiation.ResultsWe obtained an average of 8.8 106 cells per foreskin. After seven days of culture, we obtained on average 23.7 106 cells by culture. In contact with the collagen lattices, we obtained an epidermal skin and we highlighted the markers of keratinocytes differentiation as well as the markers of the dermoepidermic junction.ConclusionThe keratinocytes resulting from foreskin have a high capacity of division. These cells can divide a long time before differentiation. The observations enable us to propose with our patients the keratinocytes from foreskin for wound healing especially for burns in children.