Development and validation of a fast HPLC/photodiode array detection method for the measurement of voriconazole in human serum samples. A reference laboratory experience

The aim of this study was the development and validation of a fast and simple high performance liquid chromatography method for measuring voriconazole in human serum using ravuconazole as an external standard. The experience of the reference laboratory in therapeutic drug monitoring of voriconazole is also reported. This method is based on the precipitation of proteins in human serum and detection by HPLC/UV. Chromatographic separation is achieved using an isocratic solvent delivery with detection at 255 nm and a run time of 7 min. The assay was validated according to international guidelines and was also applied to the analysis of 141 trough serum samples from patients treated with voriconazole. All validation parameters met the criteria set out in FDA guidelines for bioanalytical methods. A high interpatient and intrapatient variability was observed in clinical samples. This method is accurate enough to perform therapeutic drug monitoring in patients receiving voriconazole treatment.

ResumenEl objetivo de este estudio fue el desarrollo y validación de un método rápido y sencillo mediante cromatografía líquida de alta eficacia para la cuantificación de voriconazol en muestras de suero de origen humano usando ravuconazol como estándar de extracción. Además se detalla la experiencia de un centro de referencia en la monitorización de voriconazol. El método está basado en la precipitación de proteínas con acetonitrilo para su posterior procesamiento en un aparato de HPLC/UV. La separación cromatográfica se llevo a cabo usando flujo isocrático con longitud de onda de detección a 255 nm y un tiempo de análisis de 7 minutos. En ensayo se validó de acuerdo con las guías internacionales y se aplicó al análisis de 141 muestras de pacientes tratados. Todos los parámetros de validación cumplían los criterios de la Guía de la FDA para la validación de métodos bioanalíticos. Se observó una gran variabilidad intra e interpaciente en las muestras clínicas evaluadas. El método es suficientemente preciso y exacto para la monitorizacón de pacientes en tratamiento con voriconazol.