Comparaison de trois milieux pour la culture de Clostridium difficile : intérêt des milieux favorisant la germination des spores ?

RésuméBut de l’étudeClostridium difficile est le principal agent des diarrhées bactériennes postantibiotiques et nosocomiales. Depuis l’émergence du clone NAP1/027 hypervirulent et épidémique en Europe, il apparaît nécessaire d’isoler les souches de C. difficile pour réaliser un suivi épidémiologique par typage moléculaire. Ce travail a eu pour objectif de comparer trois conditions de culture sélective pour l’isolement de C. difficile.MéthodesCent trente selles de patients hospitalisés à l’hôpital Jean-Verdier ont été ensemencées sur le milieu commercial CLO (BioMérieux) et sur un milieu préparé au laboratoire (CCTa : Columbia, céfoxitine 8 mg/l, cyclosérine 250 mg/l, sang de cheval 5 %, taurocholate de sodium 0,1 %) avec et sans choc alcoolique (EtOH) préalable. C. difficile a été isolé dans 38 selles et les colonies ont été dénombrées sur chaque milieu.RésultatsL’intensité de fluorescence des colonies de C. difficile est comparable sur CLO et CCTa-EtOH, leur aspect étant plus caractéristique sur CLO. Ce milieu apparaît très sélectif contrairement au milieu CCTa sur lequel une flore associée gêne la lecture de la fluorescence et nécessite le réisolement des colonies suspectes. Sur CCTa ± EtOH on dénombre en moyenne 30 fois plus de colonies de C. difficile que sur CLO, suggérant une forte proportion de spores dans les selles.ConclusionsLe milieu CLO est performant pour l’isolement de C. difficile malgré sa sélectivité. Néanmoins, il apparaît intéressant d’associer un milieu favorisant la germination des spores tel que le milieu CCTa ensemencé après choc alcoolique, permettant d’augmenter la sensibilité de détection en s’affranchissant des conditions de conservation et de transport.

AimClostridium difficile is the most common agent of postantibiotic and nosocomial bacterial diarrhoea. Since the emergence of the highly virulent and epidemic strain NAP1/027 in Europe, it appears necessary to isolate C. difficile strains to realize an epidemiologic follow-up by molecular typing. The aim of this work was to compare three selective culture conditions for the isolation of C. difficile.MethodsOne hundred and thirty stools collected from patients hospitalized at Jean Verdier were swabbed on the commercial medium CLO (BioMérieux) and on a medium prepared at the laboratory (CCTa: Columbia, cefoxitine 8 mg/l, cycloserine 250 mg/l, horse blood 5 %, sodium taurocholate 0.1 %) with and without preliminary alcoholic shock (EtOH). C. difficile was isolated from 38 stools and colonies were counted on each medium.ResultsThe fluorescence intensity of C. difficile colonies is comparable on CLO and CCTa-EtOH media, however their aspect is more characteristic on CLO. This medium appears very selective contrary to the CCTa medium on which an associated flora obstructs the fluorescence reading and requires a new isolation of the suspect strains. On average 30 times more colonies of C. difficile are counted on CCTa ± EtOH than on CLO, suggesting the presence of great proportions of spores in the stools.ConclusionsThe medium CLO is successful for the isolation of C. difficile despite of its selectivity. Nevertheless, it appears interesting to associate a medium enhancing spore germination as the CCTa medium inoculated after alcoholic shock to increase the sensitivity of detection while being freed from conservation and transport conditions.