کد مقاله | کد نشریه | سال انتشار | مقاله انگلیسی | نسخه تمام متن |
---|---|---|---|---|
5914346 | 1162734 | 2013 | 9 صفحه PDF | دانلود رایگان |
عنوان انگلیسی مقاله ISI
Detection of soluble co-factor dependent protein expression in vivo: Application to the 4â²-phosphopantetheinyl transferase PptT from Mycobacterium tuberculosis
دانلود مقاله + سفارش ترجمه
دانلود مقاله ISI انگلیسی
رایگان برای ایرانیان
کلمات کلیدی
COA4′-phosphopantetheinePDIMSFPPolyketideAcpsSPECDSFPKSIMACACPDTTIPTGGFPSECMBPSUMOBSA - BSAdhfr - DhfrSDS–PAGE - SDS-PAGEbovine serum albumin - آلبومین سرم گاوanhydrotetracycline - آنیدیدا تری سیکلینspectinomycin - اسپکتنیمایسینsmall ubiquitin-related modifier - اصلاح کننده کوچک کوچک ubiquitinsodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis - الکتروفورز ژل دوده سولفات سدیم پلی آکریل آمیدSize-exclusion chromatography - اندازه گیری کروماتوگرافی حذف شدهisopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside - ایزوپروپیل β-D-1-thiogalactopyranosideTuberculosis - بیماری سلdihydrofolate reductase - دی هیدروفلات ردوکتازdithiothreitol - دیتیوتریتولPolyketide synthase - سنتاز پلیکرتینCo-factor - عامل همکاریDifferential scanning fluorimetry - فلوریمتری اسکن دیفرانسیلLuria–Bertani - لواریا بارتانیKan - ممکن استpolymerase chain reaction - واکنش زنجیره ای پلیمرازPCR - واکنش زنجیرهٔ پلیمرازacyl carrier protein - پروتئین حامل آکیلgreen fluorescent protein - پروتئین فلورسنت سبزmaltose binding protein - پروتئین متصل به مالتوزKanamycin - کانامایسینimmobilized metal ion affinity chromatography - کروماتوگرافی جذب یون فلز بی حرکتیcoenzyme A - کوآنزیم A
موضوعات مرتبط
علوم زیستی و بیوفناوری
بیوشیمی، ژنتیک و زیست شناسی مولکولی
زیست شناسی مولکولی
پیش نمایش صفحه اول مقاله
چکیده انگلیسی
The need for early-on diagnostic tools to assess the folding and solubility of expressed protein constructs in vivo is of great interest when dealing with recalcitrant proteins. In this paper, we took advantage of the picomolar sensitivity of the bipartite GFP1-10/GFP11 system to investigate the solubility of the Mycobacterium tuberculosis 4â²-phosphopantetheinyl transferase PptT, an enzyme essential for the viability of the tubercle bacillus. In vivo and in vitro complementation assays clearly showed the improved solubility of the full-length PptT compared to its N- and C-terminally truncated counterparts. However, initial attempts to purify the full-length enzyme overexpressed in Escherichia coli cells were hampered by aggregation issues overtime that caused the protein to precipitate within hours. The fact that the naturally occurring Coenzyme A and Mg2+, essentials for PptT to carry out its function, could play a role in stabilizing the enzyme was confirmed using DSF experiments. In vitro activity assays were performed using the ACP substrate from the type I polyketide synthase PpsC from M. tuberculosis, a 2188 amino-acid enzyme that plays a major role in the virulence and pathogenicity of this microbial pathogen. We selected the most soluble and compact ACP fragment (2042-2188), identified by genetic selection of in-frame fragments from random library experiments, to monitor the transfer of the P-pant moiety from Coenzyme A onto a conserved serine residue of this ACP domain.
ناشر
Database: Elsevier - ScienceDirect (ساینس دایرکت)
Journal: Journal of Structural Biology - Volume 183, Issue 3, September 2013, Pages 320-328
Journal: Journal of Structural Biology - Volume 183, Issue 3, September 2013, Pages 320-328
نویسندگان
Karine Rottier, Alexandre Faille, Thomas Prudhomme, Cécile Leblanc, Christian Chalut, Stéphanie Cabantous, Christophe Guilhot, Lionel Mourey, Jean-Denis Pedelacq,