The effect of tissue factor pathway inhibitor on the expression of monocyte chemotactic protein-3 and IκB-α stimulated by tumour necrosis factor-α in cultured vascular smooth muscle cells

SummaryBackgroundIn recent years, the importance of inflammation in restenosis has been recognized gradually. When vascular injury occurs, NF-κB, which controls transcription of many inflammatory genes in restenosis (such as monocyte chemotactic protein-3 [MCP-3]), is activated by IκB degradation, leaving the NF-κB dimer-free to translocate to the nucleus to activate specific target genes.AimsTo investigate the effect of tissue factor pathway inhibitor (TFPI) on MCP-3 expression and IκB-α degradation stimulated by tumour necrosis factor (TNF)-α in vascular smooth muscle cells (VSMCs), thus further elucidating the mechanism of the inhibitory effect of TFPI on restenosis.MethodsDulbecco's modified Eagle's medium or human recombinant adenoviruses expressing TFPI or bacterial β-galactosidase (LacZ) were used to infect rat aortic VSMCs in vitro. Enzyme-linked immunosorbent assays were used to detect exogenous TFPI expression and reverse transcription-polymerase chain reactions were used to detect MCP-3 expression after TNF-α stimulation in transfected cells. Western blotting and immunofluorescence microscopy were used to examine IκB-α expression.ResultsTFPI protein was detected in the TFPI group after gene transfer. The cells were stimulated with TNF-α for 6 hours on the third day after gene transfer. MCP-3 messenger ribonucleic acid expression was lower in the TFPI group than in the LacZ group (P < 0.05) and IκB-α degradation was lower in the TFPI group than in the LacZ group in the cytoplasm (P < 0.05).ConclusionTFPI inhibited MCP-3 expression induced by TNF-α; this effect may be propagated through the NF-κB pathway. TFPI gene transfer may be a new therapeutic strategy for inhibiting restenosis in clinical situations.

RésuméJustificationRécemment, l’importance de l’inflammation dans la genèse de la resténose a été établie. Lorsqu’une atteinte vasculaire survient, NF-KB, qui contrôle la transcription de nombreux gènes de l’inflammation dans la resténose telle que la protéine 3 (MCP-3), chimiotactique monocytaire est activée avec la dégradation d’IKβ et la libération du dimère NF-KB, et une translocation nucléaire qui aboutit à une activation spécifique des gènes cibles.ObjectifInvestiguer l’effet de l’inhibition de la voie du facteur tissulaire (TFPI) sur l’expression de MCP-3 et la dégradation de IKB-α stimulée par le TNF-α au sein des cellules musculaires lisses vasculaires et ce afin de déterminer les conséquences de l’inhibition du TFPI sur la resténose.MéthodeLe TFPI humain ou l’adénovirus recombinant LacZ ou le DNEM ont été utilisés pour infecter les cellules musculaires lisses vasculaires (aorte de rat) in vitro. Le test d’Elisa était utilisé pour détecter l’expression du TFPI exogène et la technique RT-PCR a été utilisée pour détecter l’expression de MCP-3 après stimulation du TNF-α dans des cellules transfectées. Les techniques de Western Blot et la microscopie par immunofluorescence ont été utilisées pour examiner l’expression de IKB-α.RésultatsLa protéine TFPI a été détectée dans le groupe TFPI après transfert génique. Les cellules ont été stimulées par le TNF-α pendant six heures, et à j3 après transfert génique. L’expression du MCP-3 ARNm dans le groupe TFPI était plus bas que dans le groupe LacZ (p < 0,05) et la dégradation du IKB-α dans le groupe TFPI était plus bas que dans le groupe LacZ dans le cytoplasme (p < 0,05).ConclusionLe TFPI peut donc inhiber l’expression de MCP-3 induite par le TNF-α et cet effet peut être propagé au travers de la voie NF-KB. Le transfert de gène TFPI pourrait être une nouvelle stratégie thérapeutique pour favoriser l’inhibition de la resténose en pratique clinique.